[发明专利]一种烟酰胺腺嘌呤二核苷酸类化合物生物合成方法

权利要求书

1.一种烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的合成方法，包括如下步骤：

(a)制备喹啉酸；

(b)喹啉酸在喹啉酸磷酸转移酶的作用下与焦磷酸核糖反应生成烟酸单核苷酸；

(c)利用烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的补救合成途径，完成从烟酸单核苷酸到酰胺腺嘌呤二核苷酸的制备；

所述喹啉酸的制备方法包括如下步骤：

(1)以分支酸为起始物，经过转氨重排反应生成氨基脱氧异分支酸；

(2)氨基脱氧异分支酸脱去丙酮酸部分生成2,3-二氢-3-羟基邻氨基苯甲酸；

(3)2,3-二氢-3-羟基邻氨基苯甲酸脱氢生成3-羟基邻氨基苯甲酸；

(4)3-羟基邻氨基苯甲酸通过氧化开环重排反应生成喹啉酸；

所述步骤(1)中，采用2-氨基-4-脱氧分支酸合酶催化分支酸转氨重排生成氨基脱氧异分支酸；

所述步骤(2)中，采用2,3-二氢-3-羟基邻氨基苯甲酸合酶催化氨基脱氧异分支酸脱去丙酮酸部分生成2,3-二氢-3-羟基邻氨基苯甲酸；

所述步骤(3)中，采用DHHA-2,3-脱氢酶催化2,3-二氢-3-羟基邻氨基苯甲酸脱氢生成3-羟基邻氨基苯甲酸；

所述步骤(4)中，采用3-羟基邻氨基苯甲酸-3,4-双加氧酶催化3-羟基邻氨基苯甲酸氧化开环重排反应生成喹啉酸。

2.一种烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸的合成方法，包括如下步骤：

(I)按照权利要求1所述的方法制备得到烟酰胺腺嘌呤二核苷酸；

(Ⅱ)烟酰胺腺嘌呤二核苷酸在烟酰胺腺嘌呤二核苷酸激酶催化下与ATP反应生成烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸。

3.一种合成喹啉酸的方法，包括如下步骤：

(1)以分支酸为起始物，经过转氨重排反应生成氨基脱氧异分支酸；

(2)氨基脱氧异分支酸脱去丙酮酸部分生成2,3-二氢-3-羟基邻氨基苯甲酸；

(3)2,3-二氢-3-羟基邻氨基苯甲酸脱氢生成3-羟基邻氨基苯甲酸；

(4)3-羟基邻氨基苯甲酸通过氧化开环重排反应生成喹啉酸；

所述步骤(1)中，采用2-氨基-4-脱氧分支酸合酶催化分支酸转氨重排生成氨基脱氧异分支酸；

所述步骤(2)中，采用2,3-二氢-3-羟基邻氨基苯甲酸合酶催化氨基脱氧异分支酸脱去丙酮酸部分生成2,3-二氢-3-羟基邻氨基苯甲酸；

所述步骤(3)中，采用DHHA-2,3-脱氢酶催化2,3-二氢-3-羟基邻氨基苯甲酸脱氢生成3-羟基邻氨基苯甲酸；

所述步骤(4)中，采用3-羟基邻氨基苯甲酸-3,4-双加氧酶催化3-羟基邻氨基苯甲酸氧化开环重排反应生成喹啉酸。

4.如权利要求1-3任一所述的方法，其特征在于：所述DHHA-2,3-脱氢酶为脱氢酶A或脱氢酶B或脱氢酶C或脱氢酶D或脱氢酶E或脱氢酶F或脱氢酶G；

所述脱氢酶A是由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

所述脱氢酶B是由序列表中序列11所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

所述脱氢酶C是由序列表中序列12所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

所述脱氢酶D是由序列表中序列13所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

所述脱氢酶E是由序列表中序列14所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

所述脱氢酶F是由序列表中序列15所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

所述脱氢酶G是由序列表中序列16所示的氨基酸序列组成的蛋白质。

5.权利要求1中所述的2-氨基-4-脱氧分支酸合酶、2,3-二氢-3-羟基邻氨基苯甲酸合酶、DHHA-2,3-脱氢酶和3-羟基邻氨基苯甲酸-3,4-双加氧酶在烟酰胺腺嘌呤二核苷酸类化合物合成中的应用。