[发明专利]一种检测痕量单链DNA片段的方法在审
| 申请号： | 201810613310.9 | 申请日： | 2018-06-14 |
| 公开（公告）号： | CN108588197A | 公开（公告）日： | 2018-09-28 |
| 发明（设计）人： | 陆骊工;刘少卿;占美晓;李勇;何旭;忻勇杰;肖静 | 申请（专利权）人： | 珠海市人民医院 |
| 主分类号： | C12Q1/686 | 分类号： | C12Q1/686 |
| 代理公司： | 南京中律知识产权代理事务所(普通合伙) 32341 | 代理人： | 沈振涛 |
| 地址： | 519000 *** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 粘性末端 富集 单链DNA片段 目标DNA片段 捕获目标 目标DNA 种检测 痕量 分子生物学检测 操作流程 产物纯化 文库构建 芯片杂交 样品制备 荧光免疫 起始量 捕获 | ||
1.一种检测痕量单链DNA片段的方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)设计粘性末端Adapter对，包括Adapter L和Adapter R；其中，Adapter L用于捕获目标单链DNA片段的5`端，Adapter R用于捕获目标单链DNA片段的3`端；
(2)向含目标单链DNA片段的样品中加入粘性末端Adapter对反应，在DNA Ligase的作用下，Adapter对与目标单链DNA片段的粘性末端连接；
(3)步骤(2)产物纯化后，通过PCR扩增即得富集后的目标单链DNA片段。
2.根据权利要求1所述的一种检测痕量单链DNA片段的方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)使用核酸检测仪对单链DNA片段进行质控；
(2)向PCR管中加入1ul质控后的单链DNA片段，再加入反应试剂，在PCR仪中20-37℃下反应30min，反应试剂为：
反应试剂 体积 含单链DNA片段的样品 20ul T4 Polymerase Buffer(10x) 2.5ul T4 PNK 2ul T4 DNA Ligase Buffer(10x) 2.5ul T7 DNA Ligase 1ul Adapter L 2.5ul Adapter R 2.5ul 水 加至50ul
(3)步骤(2)的产物用1.8倍体积的AMPure XP beads进程纯化，回溶在23ul的水中；再加入PCR反应体系，在PCR仪中循环反应；
其中，PCR反应体系为：
循环反应程序为：95℃，45s；进入循环：98℃，20s；55℃，30s；72℃，30s，共25个循环；72℃，1min；4℃，∞；
(4)步骤(3)的产物用1.8倍体积的AMPure XP beads进程纯化，即可。
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