[发明专利]2-氨基芴-2’-脱氧腺苷加合物的结构及检测方法

说明书

本发明公开了2‑氨基芴‑2’‑脱氧腺苷加合物的结构，可以采用32P后标记法、免疫分析法、免疫毛细管电泳激光诱导荧光法、液相色谱‑串联质谱法(LC‑MS/MS)、微分离‑质谱联用法等方法进行检测。

1.技术领域

本发明涉及2-氨基芴-2′-脱氧腺苷加合物的结构及检测方法。

2.背景技术

DNA加合物是亲电性的化合物或其代谢产物和生物体内大分子形成共价相连的化合物，是DNA化学损伤的最重要和最普遍的形式。这种加合物一旦逃避自身的修复，就可能成为致突、致畸、致癌的最小因子。因此DNA加合物的形成被认为是致肿瘤过程的一个重要起始阶段。研究表明许多化学品的致突变、致畸及致癌效应与DNA加合物的形成有关。通过DNA加合物与致突变和致癌关系的研究，人们认识到DNA加合物可能是化学致癌物与癌症之间的一个分子桥梁。研究DNA加合物有助于理解化学有毒物的致癌致突变的分子生物学机制。另一方面，DNA加合物的发现对于药物的致癌、致突变性来说可能具有早期发现和诊断的意义。

3.发明内容

2-氨基芴-2′-脱氧腺苷加合物，其结构为可以采用³²P后标记法、免疫分析法、免疫毛细管电泳激光诱导荧光法、液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)、微分离-质谱联用法等方法进行检测，在2-氨基芴和2′-脱氧腺苷的孵育体系中，2-氨基芴和小牛胸腺DNA的孵育体系中及给药2-氨基芴的动物或人体内可以检测该加合物。

4.具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步描述。该实施例仅用于说明本发明而不限制本发明的范围。

实施例1利用高效液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS/MS)检测2-氨基芴-2′-脱氧腺苷加合物。2-氨基芴、2′-脱氧腺苷在肝微粒体、还原型辅酶II存在的情况下共同孵育，样品加等体积冰乙腈终止反应，离心，过滤，HPLC-MS/MS以全扫描和产物离子扫描模式检测(正离子模式)，检测到2-氨基芴-2′-脱氧腺苷加合物准分子离子[M+H]+m/z431.0，产物离子[M+H]⁺m/z315.1，[M+H]⁺m/z136.3，以上产物离子分别与2-氨基芴及2′-脱氧腺苷的产物离子相对应，表明该加合物由2-氨基芴和2′-脱氧腺苷结合形成。2-氨基芴、小牛胸腺DNA在肝微粒体、还原型辅酶II存在的情况下共同孵育，高速离心，提取上清液DNA，酶解，过固相萃取柱，洗脱液浓缩，HPLC-MS/MS在正离子模式，以多反应监测(MRM，离子对为m/z431.0 和m/z315.1)模式检测，能检测到相应加合物。

5.附图说明

说明书附图1为2-氨基芴-2′-脱氧腺苷加合物产物离子图。