[发明专利]橡胶树胚状体诱导培养基、胚性愈伤组织的诱导方法及抗性愈伤组织的培育方法

说明书

本发明提供了一种橡胶树胚状体诱导培养基、胚性愈伤组织的诱导方法及抗性愈伤组织植株再生的培育方法，属于植物组织培养技术领域。所述橡胶树胚状体诱导培养基，以改良MS培养基为基本培养基，包括Kt、NAA、6‑BA、水杨酸、亚精胺、酸水解酪蛋白、椰子液体胚乳椰子水、活性炭、蔗糖和植物凝胶。本发明提供的胚状体诱导培养基进行橡胶树花药体细胞胚诱导胚性愈伤组织的体细胞胚诱导率相较于花药脱分化愈伤组织的提高2.04～2.16倍。

技术领域

本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种橡胶树胚状体诱导培养基、胚性愈伤组织的诱导方法及抗性愈伤组织的培育方法。

背景技术

巴西橡胶树(Hevea brasiliensis Müll.Arg.)隶属于大戟科(Euphorbiaceae)，橡胶树属(Hevea)，是多年生异花授粉乔木，又称橡胶树，在我国主要分布于海南、云南、广东和广西等省份，是天然橡胶的主要来源。天然橡胶作为一种国家战略资源，在工业发展和国防建设上的作用举足轻重，截止2016年，世界天然橡胶消费量连续7年增长。我国作为天然橡胶的第一大进口国和消费国，供需矛盾日益突出。橡胶树病害是橡胶生产中的一个突出问题，种植高产抗病橡胶树品种是维持橡胶树高产量的一项有效措施，但由于我国橡胶树抗病种质资源匮乏，且传统的育种过程由于受到橡胶树本身属性、生长过程长、育种早期受限等因素的影响，使得采用传统的育种方法进行品种改良十分困难。

随着基因工程和分子育种技术日渐成熟完善，缩短育种周期，拓展橡胶树的遗传范围，培育转基因抗病橡胶树将成为培育抗病橡胶树品种的有效途径。农杆菌转化法因具有操作简单、转化机理清晰、转化费用低、容易整合外源基因且变异率低、整合位点稳定、拷贝数低等特点而被植物遗传转化工作者广泛应用(Song GC,Lee S,Hong J,Choi HK,HongG.H,Bae DW,Ryu CM.Aboveground insect infestation attenuates belowgroundAgrobacterium-mediated genetic transformation.New Phytologist,2015,207(1):148-158.)。一个高效稳定的农杆菌介导的橡胶树遗传转化体系对于橡胶树品种改良和功能基因的研究至关重要(Leclercq et al.，2010)，但一个成功的农杆菌遗传转化体系需要具备较高的感染率和转化植株易于再生两方面的先决条件(李卫，郭光沁，2000)。而为了获得较高的遗传转化率并保证转化材料的再生效率，遗传转化受体的选择和处理非常重要。通过橡胶未受精子房、未受精胚珠、未成熟花药、幼芽等组织相继成功诱导出再生植株，但在橡胶树的遗传转化研究中，不同组织转化率各不相同，总体效率偏低。直至今日，也只有花药和内珠被作为外植体诱导的愈伤组织转化受体材料获得转基因植株的报道。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种橡胶树胚状体诱导培养基、胚性愈伤组织的诱导方法及抗性愈伤组织的培育方法，所述诱导方法诱导率高，且发育形成的植株再生率高。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

橡胶树胚状体诱导培养基，以改良MS培养基为基本培养基，还包括以下含量组分：Kt 0.55～0.65mg/L、NAA0.14～0.16mg/L、6-BA0.04～0.06mg/L、水杨酸0.04～0.06mg/L、亚精胺4.5～5.5mg/L、酸水解酪蛋白290～310mg/L、椰子水体积浓度7～9％、活性炭质量浓度0.09～0.11％、蔗糖55～65g/L和植物凝胶2.2～2.4g/L；