[发明专利]一株具有内毒素脱毒活性的毕赤酵母及其应用

说明书

本发明公开了一种具有内毒素脱毒活性的毕赤酵母及其在内毒素脱毒中的应用。通过采用高通量选育，筛选获得了一种具有内毒素脱毒活力的毕赤酵母，保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为：CCTCC NO：M2017723。本发明也公开了毕赤酵母在内毒素脱毒中的应用：将毕赤酵母完整细胞、细胞壁组分或发酵液添加于内毒素污染的饲料、食品或发酵液中，内毒素残余水平降低至60%以下。本发明可应用于饲料、食品、生物制品等产品中内毒素的脱毒。

所属技术领域

本发明公开了一种具有内毒素脱毒活性的毕赤酵母及其在内毒素脱毒中的应用。

背景技术

内毒素是革兰阴性菌的外壁成分，也是主要致病因子之一，饲料中污染细菌后，释放的内毒素可危害畜禽健康，影响养殖经济效益。食品中污染革兰氏细菌后，释放的内毒素可引起人体中毒，但人们对其重视程度还远远不够。生物制品中内毒素（热原）污染较常见，因此寻找具有内毒素脱毒活力的微生物菌株具有重要意义。

酵母是广泛用于食品酿造、饲料添加剂、生化制品以及工业生物技术的一大类单细胞真核微生物，酵母还具有生物脱毒的功能，在饲料、食品和环保领域具有重要应用前景。

发明内容

本发明目的是提供一种能够高效吸附内毒素的毕赤酵母，以及该菌株的内毒素吸附特性具备的潜在的应用性能。

为解决上述技术问题，本发明通过在山东圣琪生物有限公司厂区内土壤中广泛筛选，通过酵母-内毒素的孵育反应体系，筛选获得一株高效吸附内毒素的毕赤酵母。

本发明的技术方案，一组具有内毒素吸附特性的毕赤酵母（Pichia pastoris），将其分类命名为Pichia pastoris Sunkeen-66，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO：M2017723，保存日期为2017.11.23。

毕赤酵母在内毒素脱毒应用，包括以下步骤 ：

①发酵培养 ：将培养基投入到发酵罐中，灭菌，然后将保藏编号为CCTCC NO：M2017723的毕赤酵母制成发酵种子接种，接种至发酵罐中，流加营养液进行培养；

②毕赤酵母细胞及发酵液处理 ：发酵一段时间后，发酵液通过离心沉降等处理获得毕赤酵母细胞、细胞壁组分及发酵上清液；

③内毒素脱毒 ：将上述毕赤酵母细胞、细胞壁组分或发酵上清液加入被内毒素污染的饲料、食品、生物制品中，可降低内毒素的残余浓度。

优选地，将将步骤②中的发酵液在3000-6000 rpm离心，收集酵母泥，采用去离子水液进行洗涤，再在3000-6000 rpm离心，收集得毕赤酵母细胞。

将上述所收集得毕赤酵母细胞在80-95 ℃灭活30 min，降温55-65 ℃，加入一定量蛋白酶，酶解5-15小时，离心分离，收集重相，制得细胞壁组分；或将收集得毕赤酵母细胞在80-95 ℃灭活30 min-120 min，pH 5.0-7.0，降温至65 ℃以下，离心分离，收集重相制得细胞壁组分。

所述的具有内毒素脱毒性能的毕赤酵母，包括毕赤酵母全细胞、或毕赤酵母细胞壁组分、或毕赤酵母发酵液。