[发明专利]蝙蝠蛾拟青霉ZJB18001及其应用

说明书

本发明公开了一种产虫草素的蝙蝠蛾拟青霉菌株及其应用，所述的蝙蝠蛾拟青霉菌株(Paecilomyces hepial)ZJB2018001是从野生型冬虫夏草中分离所得，通过对野生型的冬虫夏草进行分离、纯化、鉴定得到蝙蝠蛾拟青霉菌株。并通过对这株菌进行物理化学诱变使得虫草素含量提高约3倍。

(一)技术领域

本发明涉及一株来自冬虫夏草共生菌蝙蝠蛾拟青霉虫草素高产菌株的筛选及其应用。

(二)背景技术

冬虫夏草(Cordyceps sinensis(Berk.)Sacc.)为麦角菌科真菌冬虫夏草菌寄生在鳞翅目(Lepidoptera)蝙蝠蛾科昆虫(Hepialus armoricanus Oberthur)幼虫上的子座及幼虫尸体上的复合体(包括子座和虫体)。冬虫夏草是我国民间惯用的一种名贵滋补药材，其营养成分高于人参，可入药，也可食用，是上乘的佳肴，具有很高的营养价值，具有免疫调节、抗菌、抗肿瘤、抗氧化、抗衰老、降血糖血脂等广泛的药理作用。在临床上对肺虚久咳，气喘，肺结核咯血，盗汗，肾虚腰膝酸痛，阳痿遗精，神经衰弱及化疗、放疗后的红细胞下降都有疗效。

冬虫夏草菌是一种子囊菌，其在蝙蝠蛾幼虫体内形成菌核到长出冬虫夏草子座和子囊，这过程属于冬虫夏草有性型阶段，此时的冬虫夏草称有性型。从冬虫夏草的子囊孢子发芽成菌丝(或产生分生孢子——发芽成菌丝)侵染蝙蝠蛾幼虫，到冬虫夏草菌丝在幼虫体内增殖、消化吸收幼虫体全部营养的过程属冬虫夏草菌种无性增殖阶段。而在人工培养、液体发酵等实际生产中使用的是无性阶段的冬虫夏草菌，因而冬虫夏草无性型的鉴定非常重要。蝙蝠蛾拟青霉(Paecilomyces hepial)已被证明是冬虫夏草的共生菌的一种，具有与天然冬虫夏草相同的活性成分和药效。

虫草素，又称虫草菌素，即3′-脱氧腺苷，它的分子式是C₁₀H₁₀N₅O₃,为含氮配糖体的核酸衍生物，属嘌呤类生物碱。它作为冬虫夏草的一种活性成分常用于治疗肿瘤等疾病。早在1950，Cuningham等从蛹虫草(Cordyceps militaris)的原浆液中分离到一种腺苷类活性物质，命名为cordycepin，它是由腺苷和有碳支键的脱氧戊糖组成的一种核苷酸，被称为3’-脱氧腺苷(3’-deoxyadenosine，3’-dA)，后来经过进一步的鉴定，该物质被证实是我国传统中药冬虫夏草(C.sinensis)的有效成分，其中文名称为虫草素，又称蛹虫草菌素、虫草菌素。虫草素作为第一个从真菌中分离出来的核苷类抗生素，具有抗菌、抗氧化、抗肿瘤和增强人体免疫功能等显著作用，越来越受到人们的重视。

(三)发明内容

本发明目的是分离鉴定蝙蝠蛾拟青霉，并提高蝙蝠蛾拟青霉中虫草素的含量。通过对野生的冬虫夏草进行筛选分离，利用形态学、分子生物学以及Biolog代谢指纹图谱相结合的方法对得到的蝙蝠蛾拟青霉(Paecilomyces hepial)原始菌株进行鉴定。然后对获得的原始菌株进行物理化学诱变，得到虫草素含量稳定提高的菌株ZJB18001，使其在人工发酵中能够得到更加广泛的应用。

本发明采用的技术方案是：

本发明提供一种源自冬虫夏草的蝙蝠蛾拟青霉(Paecilomyces hepiali)ZJB18001，所述蝙蝠蛾拟青霉ZJB18001保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期2018年2月6号，保藏编号CCTCC NO:M 2018091，保藏地址为中国武汉，武汉大学，邮编430072。

本发明还提供一种所述蝙蝠蛾拟青霉ZJB18001在提高虫草素产量中的应用，所述应用是将蝙蝠蛾拟青霉ZJB18001接种至发酵培养基，在18-25℃、150rpm条件下发酵培养，将发酵液离心，获得含虫草素的菌体，将菌体干燥，提取虫草素；所述发酵培养基终浓度组成为：葡萄糖18-25g/L，蛋白胨4-8g/L，KH₂PO₄1-3g/L，MgSO₄ 0.4-0.8g/L，溶剂为自来水，pH5.5-6.5。