[发明专利]检测ABCG8内含子9突变的引物、方法和试剂盒

说明书

本发明公开了检测植物固醇血症相关基因ABCG8内含子9区域35113delA缺失突变的引物、方法和试剂盒。采用Sanger测序技术，可快速发现该区域突变位点。该突变位点的发现便于判断和分析产生ABCG8基因突变是否会造成植物固醇血症，以及辅助查明造成该病的病因。

技术领域

本发明属生命科学和生物技术领域，特别涉及检测植物固醇血症ABCG8基因内含子9突变的引物，采用普通PCR技术，可用于快速检测ABCG8内含子9的突变情况。

背景技术

谷甾醇血症是一种常染色体隐性遗传疾病，其特征是血浆甾醇水平高(比正常人高10-25倍)。受胃肠道固醇血症影响的个体的其他特征是肌腱和结节性黄瘤、溶血性发作和关节炎，以及加速动脉粥样硬化和冠状动脉疾病。谷甾醇血症的个体中高水平的植物甾醇通常是由肠吸收增加引起的，因为谷甾醇ATP结合盒(ABC)转运体ABCG5或ABCG8在染色体2Pi上起作用，这是正常的，对甾醇的排泄起作用。所有的谷甾醇血症都是由ABCG8突变引起的(大约74％的病例)或ABCG5(约26％的病例)。

检测ABCG8基因突变的目的是：1。辨别早期发生高胆固醇血症和高水平植物固醇血症患者的ABCG8遗传特征。2。对高胆固醇血症家族史的无症状家族成员进行家族性早发性高胆固醇血症和高水平的植物甾醇的疑似诊断的确认。

ABCG8测序是通过扩增所有外显子和内含子/外显子边界进行的，然后进行双向Sanger测序。全基因测序的敏感性估计约99％的单核苷酸替换和/缺失。所有核苷酸变化的分析目前数据库和文献的预测致病性。谷甾醇血症基因(ABCG8)可以单独或作为一个面板进行测序。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测ABCG8基因内含子9突变的引物，采用PCR技术，可用于快速检测ABCG8基因内含子9的突变情况，并发现植物固醇血症遗传相关的突变类型，从而为判断植物固醇血症遗传信息提供依据。

检测ABCG8内含子9基因突变的引物，其特征在于，包括扩增ABCG8基因内含子9序列的引物，其碱基序列为：

ABCG8-intron9-F:TGTAAAACGACGGCCAGTAAATGAGGCTTATGGAGACTGTG

ABCG8-intron9-R:AACAGCTATGACCATGGTAGCTCGTGTTCTGCTGTCAA。

进一步地，检测ABCG8内含子9基因突变的引物还包括测序引物，其碱基序列为：

M13-F：TGTAAAACGACGGCCAGT

M13-R：AACAGCTATGACCATG。

本发明还提供了检测ABCG8内含子9基因突变的方法，包括以下步骤：

(1)抽提血液中的基因组DNA；

(2)用PCR扩增步骤1中提取的DNA；其中扩增ABCG8基因内含子9序列的引物碱基序列为：

ABCG8-intron9-F:TGTAAAACGACGGCCAGTAAATGAGGCTTATGGAGACTGTG

ABCG8-intron9-R:AACAGCTATGACCATGGTAGCTCGTGTTCTGCTGTCAA；

(3)对步骤2中的扩增产物进行测序；测序引物碱基序列为：

M13-F：TGTAAAACGACGGCCAGT

M13-R：AACAGCTATGACCATG；

(4)对测序结果进行判断，确定ABCG8内含子9基因是否发生突变。