[发明专利]一种白介素-6的定量检测方法及检测试剂盒在审
| 申请号： | 201810619212.6 | 申请日： | 2018-06-15 |
| 公开（公告）号： | CN108519487A | 公开（公告）日： | 2018-09-11 |
| 发明（设计）人： | 程云龙;于林;李双法;李奎;董亚玲;刘功成;付光宇;吴学炜;苗拥军 | 申请（专利权）人： | 郑州安图生物工程股份有限公司 |
| 主分类号： | G01N33/68 | 分类号： | G01N33/68 |
| 代理公司： | 郑州异开专利事务所(普通合伙) 41114 | 代理人： | 王霞 |
| 地址： | 450016 河南省*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 生物素化抗体 免疫复合物 偶联抗体 试剂盒 超顺磁微粒 定量检测 检测试剂 白介素 灵敏度 亲和素 抗原 制备 洗涤 发光 化学发光底物 化学发光试剂 电化学发光 发光底物 发明试剂 抗原反应 酶促作用 生物素化 测定仪 方法学 酶反应 检测 顺磁 分析 | ||
1.一种白介素-6的定量检测方法，其特征在于：包括下述步骤：
第一步，取抗体偶联超顺磁微粒、生物素化抗体与待测样本发生特异性结合反应，得到第一反应物；其中所述抗体偶联超顺磁微粒为超顺磁微粒与抗IL-6单克隆抗体B偶联得到的产物，生物素化抗体为生物素N羟基丁二酰亚胺酯与抗IL-6单克隆抗体A偶联得到的产物；
第二步，取亲和素与第一反应物发生特异性结合反应，得到第二反应物；其中所述的亲和素为链霉亲和素蛋白；
第三步，取生物素化酶与第二反应物发生特异性结合反应，得到第三反应物；其中生物素化酶为生物素N羟基丁二酰亚胺酯与酶偶联得到的产物；
第四步，取化学发光底物与第三反应物发生酶促反应，测定发光信号，获得白介素-6的浓度值。
2.根据权利要求1所述的白介素-6的定量检测方法，其特征在于：所述第一步、第二步、第三步中发生特异性结合反应的温度为37℃，反应时间为3~15min；第四步酶促反应的温度为37℃，反应时间为5~15min。
3.一种定量检测血液中白介素-6的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括生物素化抗体、生物素化酶、亲和素、化学发光底物和抗体偶联超顺磁微粒；其中：
所述生物素化抗体为生物素N羟基丁二酰亚胺酯与抗IL-6单克隆抗体A偶联得到的产物；
所述生物素化酶为生物素N羟基丁二酰亚胺酯与酶偶联得到的产物；
所述抗体偶联超顺磁微粒为超顺磁微粒与抗IL-6单克隆抗体B偶联得到的产物。
4.根据权利要求3所述的定量检测血液中白介素-6的试剂盒，其特征在于：所述超顺磁微粒表面的活性基团为羧基、氨基或苯甲磺酰基。
5.根据权利要求3所述的定量检测血液中白介素-6的试剂盒，其特征在于：所述亲和素为链霉亲和素蛋白，其反应浓度为1~5mg/ml。
6.根据权利要求3所述的定量检测血液中白介素-6的试剂盒，其特征在于：所述酶为辣根过氧化物酶，所述化学发光底物为鲁米诺或异鲁米诺。
7.根据权利要求3所述的定量检测血液中白介素-6的试剂盒，其特征在于：所述酶为碱性磷酸酶，所述化学发光底物为3-（2-螺旋金刚烷）-4-甲氧基-（3-磷氧酰）-苯基-1，2-二氧环乙烷二钠盐。
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