[发明专利]一株阴沟肠杆菌FY-0701以及其构建方法和应用

说明书

本发明提供了一株阴沟肠杆菌FY‑0701以及其构建方法和应用，属于基因工程技术领域，该阴沟肠杆菌FY‑0701的保藏编号为CGMCCNo.15619。本发明提供的一株阴沟肠杆菌FY‑0701能够达到深层调剖的效果。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及一株阴沟肠杆菌FY-0701以及其构建方法和应用。

背景技术

近年来，三次开采技术被应用于提高原油生产(Green and Willhite,1998)，微生物提高石油采收率(MEOR)技术由于其诸多优势如环境友好性、成本低效益高、高生物降解性和低毒性而被认为是一种重要的三次开采技术(Ghojavand et al.,2012；Kobayashi etal.,2011；Lazar et al.,2007；Makkar et al.,2011)。MEOR技术应用微生物和/或其代谢产物如有机酸、气体、生物表面活性剂和聚合物，通过向井内注入营养和培养微生物来延长油藏的寿命(Sen,2008；Sun et al.,2011).

异质性是中国一些油藏石油采收率低的主要原因之一，注入水快速流过高渗透性通道到达生产井，导致仅有一小部分的原油被采出(Han et al.,1999；Sun et al.,2013)。为了提高注入水的驱动效率，聚合物被用于高渗透地区的选择性封堵(Ana et al.,2009；Zheng et al.,2000)。目前，实验和生产中应用最广泛的聚合物是聚丙烯酰胺和黄原胶(Ana et al.,2009；Melo et al.,2002)。聚丙烯酰胺是一种难降解且有毒的化学聚合物。黄原胶是一种水溶性的对生物降解极为敏感的生物聚合物(TaylorandNasr-EI-Din,1998)。因此，寻找一种无毒且对生物降解敏感性低但又可被降解的聚合物势在必行。

细菌纤维素(Bacterial Cellulose,BC)是由细菌产生的一种不溶于水的多糖，其无毒且降解周期长(Ma et al.,2012；Nathan et al.,2011)。因此，细菌纤维素产生菌株可以注入到油藏中选择性的封堵并提高石油采收率。目前，最著名的BC产生菌株Gluconacetobactersp.是严格好氧菌，不能适应油藏中的缺氧环境(Jung et al.,2010a,b)。Ma等人分离出了一株在好氧和厌氧条件下均能产生细菌纤维素的菌株并命名为Enterobactersp.FY-07(Ma et al.,2012；Ji et al.,2016)。Enterobactersp.FY-07有应用于油藏高渗透区域封堵的潜力。然而，Enterobactersp.FY-07在各种普通的碳源作为唯一碳源的情况下都能产生大量的BC，会影响油藏中细菌的迁移效率，从而影响深层调剖能力。

发明内容

本发明的目的在于提供一株阴沟肠杆菌FY-0701，能够达到深层调剖的效果。

本发明提供了一株阴沟肠杆菌FY-0701，该阴沟肠杆菌FY-0701的保藏编号为CGMCCNo.15619。

本发明还提供了一株阴沟肠杆菌FY-0701的构建方法，包括以下步骤：

1)以阴沟肠杆菌FY-07基因组为模版，用引物Fpg1u和Fpg1l扩增果糖1,6-2磷酸化酶基因的上游同源臂，所述Fpg1u的序列如SEQ ID No.1所示，所述Fpg1l的序列如SEQIDNo.2所示；

以阴沟肠杆菌FY-07基因组为模版，用引物Fpg3u和Fpg3l扩增果糖1,6-2磷酸化酶基因的下游同源臂，所述Fpg3u的序列如SEQ ID No.3所示，所述Fpg3l的序列如SEQ IDNo.4所示；

2)以pGFP质粒为模版，用引物Fpg2u和Fpg2l扩增绿色荧光蛋白基因，所述Fpg2u的序列如SEQ ID No.5所示，所述Fpg2u的序列如SEQ ID No.6所示；