[发明专利]注射接种获得感染云南烟草丛顶病4种病原物病株的方法

权利要求书

1.一种注射接种获得感染云南烟草丛顶病4种病原物病株的方法，其特征在于：具体步骤为：

1）传毒材料的准备：携带云南烟草丛顶病4种病原物的植物组织作为传毒材料；

2）传毒材料的处理：取0.5 g植物组织于灭过菌的研钵内，通过液氮冷冻研磨成粉末，加入PBS缓冲液2 mL以完全浸润粉末，然后进行研磨溶解，溶解后的匀浆以中速离心获得上清接种液；

3）注射接种：将步骤2）所得到的上清接种液，用注射器吸取后在植株叶片上扎孔注射；

4）注射接种半个月后，对接种植株进行症状观察，并通过RT-PCR技术检测云南烟草丛顶病病原物，即可获得感染4种云南烟草丛顶病病原物的活体样本。

2.根据权利要求1所述的一种注射接种获得感染云南烟草丛顶病4种病原物病株的方法，其特征在于：步骤2）中，PBS缓冲液的浓度为0.01 mol/L，pH为7.4。

3.根据权利要求1所述的一种注射接种获得感染云南烟草丛顶病4种病原物病株的方法，其特征在于：步骤2）中，中速离心的转速为8000 rpm，温度为4℃，离心时间为3 min。

4.根据权利要求1所述的一种注射接种获得感染云南烟草丛顶病4种病原物病株的方法，其特征在于：步骤3）中，每株植物选择至少2片叶片，每片叶片注射2个孔，每个孔注射量为0.1 mL。