[发明专利]植物内生菌杀虫剂及其制备方法在审

专利信息
申请号: 201810620553.5 申请日: 2018-06-15
公开(公告)号: CN108739864A 公开(公告)日: 2018-11-06
发明(设计)人: 张广喜;彭梦甜;马嘉欣;袁茜;王庆庆;陈可欣;朱雅文;冯昭中 申请(专利权)人: 江苏师范大学
主分类号: A01N63/04 分类号: A01N63/04;A01P7/04;C12N1/14
代理公司: 暂无信息 代理人: 暂无信息
地址: 221009 江*** 国省代码: 江苏;32
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摘要:
搜索关键词: 植物内生菌 杀虫剂 制备 发酵培养 菌株 害虫防治效果 纯化培养 代谢产物 驱虫效果 生产原料 特异性强 提取植物 天然产物 自然平衡 发酵液 内生菌 卫矛科 无残留 植株 果蝇 杀伤 稀释 天敌 过滤 喷洒 蚊子 无毒 致死 浓缩 筛选 测试 回归 伤害 生态 安全 保证
【权利要求书】:

1.植物内生菌杀虫剂制备方法,其特征在于,包括步骤:

S1:从卫矛科植株上提取植物内生菌;

S2:纯化培养提取的植物内生菌以备测试;

S3:将培养的植物内生菌的代谢产物稀释后分别喷洒在果蝇和蚊子上,选出高致死率植物内生菌菌株;

S4:将选出的菌株进行发酵培养;

S5:过滤并浓缩发酵培养的发酵液得植物内生菌杀虫剂。

2.根据权利要求1所述的植物内生菌杀虫剂制备方法,其特征在于,所述步骤S1具体包括:

S11:植物材料的表面消毒:采集植物时保留根部土壤,用塑料布包裹根部,保持其鲜活状态;

S12:取所采集植株的根、茎、叶的健康组织用流水冲洗干净,用70%的酒精浸泡3min,再用2%次氯酸钠浸泡3min,最后用无菌水冲洗3次用以去除附着在材料表面的消毒剂;

S13:将最后一遍浸洗的无菌水取100gl涂布在LB培养基平板上,28℃培养72h小时后无微生物长出,表明表面消毒彻底;

S14:内生菌的分离:面消毒后的植株根、茎、叶分别用无菌剪刀纵切,然后放入灭菌研钵中研磨充分;

S15:将研磨后的植物组织液加入缓冲液在28℃、l50rpm条件下振荡1h,取不同稀释梯度的溶液分别涂布在LB培养基平板上,28℃恒温培养2-14天,待菌落生长完全后挑选接入LB琼脂斜面置于4℃条件下保存;

S16:菌落形态观察:有氮培养基上划线得到单菌落,观察单菌落形态与菌体形态并记录。

3.根据权利要求2所述的植物内生菌杀虫剂制备方法,其特征在于,所述缓冲液为10mlPBS缓冲液。

4.根据权利要求1所述的植物内生菌杀虫剂制备方法,其特征在于,所述步骤S3具体包括:将培养的植物内生菌的代谢产物稀释后分别喷洒在果蝇和蚊子上,选出高致死率植物内生菌菌株作为待测菌株;将待测菌株进行多代培养,将多代培养后的植物内生菌代谢物稀释后分别喷洒在果蝇和蚊子上,选出遗传稳定性良好的菌株;将选出的遗传稳定性良好的菌株继续培养,并将其代谢产物稀释后喷洒小鼠,将对小鼠无毒的菌株作为目标菌株。

5.根据权利要求1所述的植物内生菌杀虫剂制备方法,其特征在于,所述步骤S5具体包括:过滤并浓缩发酵培养的发酵液,将浓缩后的发酵液配制成粉剂、可湿性粉剂、胶悬剂、喷射剂或气雾剂。

6.由以上任一权利要求所述的制备方法所制得的植物内生菌杀虫剂。

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