[发明专利]一种菌糠固定化菌剂的制备方法及应用方法

权利要求书

1.一种菌糠固定化菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）菌悬液的制备：将石油烃降解菌加入生理盐水制备成菌悬液；

（2）载体的制备：将菌糠清洗干净后风干，过20-80目筛备用；

（3）吸附：将所述步骤（2）中的菌糠与所述步骤（1）中的菌悬液以1:15-25（v/v）比例混合，然后置于30-37℃、120-160rpm摇床中吸附16-24h，弃掉上层溶液；

（4）离心：用生理盐水将吸附后的菌糠转移到离心管中，然后离心弃去上清液；重复上述离心操作多次后，离心所得沉淀即为固定化菌剂。

2.根据权利要求1所述的菌糠固定化菌剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中的石油烃降解菌为两株，分别为苍白杆菌（Ochrobactrum sp.）和微杆菌（Microbacteriumsp.）；所述石油烃降解菌获取方式为：将苍白杆菌（Ochrobactrum sp.）和微杆菌（Microbacterium sp.）二者的菌液以2:3体积比混合，离心后弃上清液，然后用无菌生理盐水冲洗得到；所述菌液在紫外分光光度计测定其600nm波长下吸光度数值记为OD600，测定为0.4-0.8。

3.根据权利要求1所述的菌糠固定化菌剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中菌悬液在紫外分光光度计测定其600nm波长下吸光度数值记为OD600，测定为0.4-0.8。

4.根据权利要求1所述的菌糠固定化菌剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中菌糠与菌悬液混合比例为1:20（v/v）。

5.根据权利要求1所述的菌糠固定化菌剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（4）中离心是在1000rpm下离心10min；所述离心操作次数为3-5次。

6.根据权利要求1或2所述的菌糠固定化菌剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中的石油烃降解菌获取方式为：将在液体培养基中培养的石油烃降解菌菌液离心后弃上清液，然后用无菌生理盐水冲洗得到；所述石油烃降解菌菌液为培养至对数末期的菌液，所述菌液在紫外分光光度计测定其600nm波长下吸光度数值记为OD600，测定为0.4-0.8。

7.根据权利要求6所述的菌糠固定化菌剂的制备方法，其特征在于，所述液体培养基为牛肉膏蛋白胨液体培养基，所述牛肉膏蛋白胨液体培养基成分为：牛肉膏5g、蛋白胨10g、NaCl 5g、蒸馏水1000 mL；所述液体培养基的制备是将牛肉膏、蛋白胨、NaCl、蒸馏水按比例混合后调整pH 7. 0 ～ 7.5，然后在121℃灭菌20 min即得。

8.根据权利要求1所述的菌糠固定化菌剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中菌糠是食用菌种植收获后残余废料；所述食用菌种包括杏鲍菇、平菇和金针菇。

9.权利要求1-8任一项所述制备方法得到的菌糠固定化菌剂的应用方法，其特征在于，应用于石油烃污染土壤的生物修复。

10.根据权利要求9所述菌糠固定化菌剂的应用方法，其特征在于，将所述菌糠固定化菌剂以10%的质量比投加入石油污染土壤中修复35-60天即可。