[发明专利]一种检测肿瘤并能辅助成像的试剂及其制法

说明书

本发明涉及生物医药技术领域，特别涉及一种检测肿瘤并能辅助成像的试剂及其制备方法，包括由特异性荧光素感应剂、特异抗体PD‑1和９‑（邻羧苯基）‑６‑羟基‑３Ｈ‑咕吨‑３‑酮以及所述特异性荧光素感应剂包含4‑硝基邻苯二甲酸酐、蔡酞亚胺和EDTA组成的荧光素感应剂，所述特异性荧光素感应剂的外层设置特异抗体PD‑1，所述特异性荧光素感应剂的内层设置９‑（邻羧苯基）‑６‑羟基‑３Ｈ‑咕吨‑３‑酮，特异性荧光素感应剂纳米探针富集到肿瘤部位并在近红外光的照射下，能很好地将肿瘤锁定，并且不会对其他的部位造成损失，本发明在医学领域具应用具有有深远的意义。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，特别涉及一种检测肿瘤并能辅助成像的试剂及其制备方法和应用。

背景技术

作为体内重要的信使物质和效应分子，一氧化氮(Nitric oxide，NO)参与了许多生理和病理反应，具有广泛的生理功能。然而，由于NO 是一种气体自由基，其在细胞和组织中具有扩散快、与生物目标发生反应等特点。因此，在生物体内检测NO 的形成和迁移十分困难。所以探寻能实时、快速、简便检测NO 的方法一直是研究者们竞相研究的热门课题。在众多的NO 检测方法中，荧光探针法具有非入侵式、高灵敏度、选择好以及可对检测对象在原位进行实时监控和观察等优点。为开发新的用检测NO 的荧光探针。然而，这些基于荧光成像或生物发光的纳米探针常常受到组织穿透深度的限制，无法实现深层组织中一氧化氮的检测。因此，迫切需要开发高特异性和灵敏度的新型纳米探针以实现深层组织和器官中一氧化氮的精准成像，从而提高疾病的检测灵敏度。

光声成像是基于光声转换现象的成像方法。在检测过程中，样品吸收入射激光的能量而发生热膨胀，伴随产生超声波，仪器将接收到的超声波转换为影像信息。样品对激光能量吸收的差异导致超声波强度的不同，从而形成影像的明暗差异。光声成像技术结合光学和超声两种成像技术的优点，能实现对组织体较大深度的高分辨率、高对比度的功能成像。目前，许多在近红外区有强吸收的纳米粒子被广泛用于肿瘤的光声成像。此外，对生理上的某些信号例如活性氧、酸碱性和酶响应的光声造影剂也被广泛用于疾病的检测。然而，利用光声成像技术对体内一氧化氮检测还鲜有报道。

发明内容

针对目背景技术中的诸多问题，本发明提出了一种检测肿瘤并能辅助成像的试剂，包括荧光素感应剂，所述荧光素感应剂由特异性荧光素感应剂、特异抗体PD-1和９-（邻羧苯基）-６-羟基-３Ｈ-咕吨-３-酮构成；所述特异性荧光素感应剂包含4-硝基邻苯二甲酸酐、蔡酞亚胺和EDTA组成；所述特异性荧光素感应剂的外层设置特异抗体PD-1，所述特异性荧光素感应剂的内层层设置９-（邻羧苯基）-６-羟基-３Ｈ-咕吨-３-酮。

优选地，所述4-硝基邻苯二甲酸酐、蔡酞亚胺与所述EDTA的摩尔比5.8：4：0 .5。

优选地，所述检测肿瘤并能辅助成像的试剂的粒径为70～115纳米。

本发明的另一个目的提供一中制备该试剂的方法，包括如下步骤：将4-硝基邻苯二甲酸酐、蔡酞亚胺、EDTA和９-（邻羧苯基）-６-羟基-３Ｈ-咕吨-３-酮溶解在乙二醇溶液中，然后通过旋转蒸发形成晶体或膜；然后将所述晶体或膜与特异抗体PD-1的磷酸盐缓冲溶液混合，以使形成所述特异性荧光素感应剂的外层设置特异抗体PD-1，所述特异性荧光素感应剂的内层层设置９-（邻羧苯基）-６-羟基-３Ｈ-咕吨-３-酮，并将混合液进行冻融；将冻融后的混合液进行过滤、纯化，得到检测肿瘤并能辅助成像的试剂。

优选地，所述4-硝基邻苯二甲酸酐、所述蔡酞亚胺、所述EDTA与所述９-（邻羧苯基）-６-羟基-３Ｈ-咕吨-３-酮的摩尔比为5.8：4：0 .5：12。

优选地，所述冻融为：将混合液在液氮中冷冻，然后在5.85℃条件下解冻。

优选地，所述冻融的次数为5次。

优选地，所述过滤为：将冻融后的混合液在200纳米的滤膜上过滤40～50次。