[发明专利]用于猕猴桃东红品种鉴定的分子标记引物及应用

说明书

本发明属于分子生物学及遗传育种技术领域，更具体涉及用于猕猴桃‘东红’品种鉴定的分子标记引物及应用，所述的引物为：Geo19‑159‑F:TGATTCGTTTTGACACAATGG和Geo19‑159‑R:TGCAGGCTATGGACTGAGTG。利用本发明提供的引物对东红DNA进行扩增，仅东红可特异性的扩增出280bp和282bp的条带；根据不同条带的大小和数目，也可对：楚红、GT815、H‑15、华光2号、华优、海沃德、龙山红、满天红、磨山雄5号、秦美、QS‑5、通山5号、WH‑1或厦亚1号猕猴桃进行区分。

技术领域

本发明属于分子生物学及遗传育种技术领域，更具体涉及用于猕猴桃‘东红’品种鉴定的分子标记引物及应用。

背景技术

中国是猕猴桃属植物的原产地和猕猴桃遗传资源的原始起源中心。近年来，我国猕猴桃产业稳步扩增，截至2017年全国栽培面积达240万亩，产量290万吨，均居世界首位。在品种格局上，我国立足于本土猕猴桃遗传资源研究，选育出了‘金艳’、‘东红’等猕猴桃新品种，在全球范围广泛栽培，彻底改变了世界猕猴桃产业唯‘海沃德’品种的单一格局，推动了猕猴桃市场多样化和消费的多元化。

随着猕猴桃新品种的日益推出，新品种的鉴定是亟待解决的一大难题。目前，对猕猴桃专利品种的鉴定仅通过树势、叶片形态、花期、花形态、果实外观等传统手段，难免受到环境和其他人为因素的影响。对猕猴桃品种的不确定性，限制了产业的健康持续发展，且苗木品种不纯甚至错误将造成果农经济效益严重受损。

分子标记技术能快速、准确、高效对品种进行鉴定,对保证农业生产中品种的正确性具有重要的意义。选择适宜的分子标记及其配套检测技术,建立一套简便、经济、准确而高效的品种鉴定和指纹图谱技术体系,是打击假冒伪劣种苗、保护植物遗传育种工作者和农民的合法权益，规范我国农业市场的迫切需要。

分子标记技术通过检测生物个体在基因组上产生的变异，从而对不同个体进行区分，是继形态标记和生化标记之后，发展的一种较为理想的遗传标记。在植物种质资源鉴定及育种中，对分子标记的应用已日趋成熟。SSR分子标记数量丰富且随机均匀分布于基因组，呈共显性，等位变异高，操作简便且稳定性好，已应用于大豆、苹果和葡萄等品种鉴定方面。在猕猴桃中，分子标记技术应用于猕猴桃雄性系列品种的鉴定，已为多个优异猕猴桃品种准确提供授粉雄株，提升猕猴桃的育种效率。

‘东红’猕猴桃单果重在80-130克，果实为短圆柱形，果皮无毛绿褐色，果肉多汁，酸甜适中。总糖含量高达13.45﹪，而总酸只有0.49﹪，可溶性固形物16.5﹪，富含钙、铁、钾等多种矿物质及17种氨基酸。开发适用于猕猴桃‘东红’品种的分子鉴定标记，有利于从分子水平上明确界定专利品种，利于对猕猴桃品种进行鉴定和品种保护。

发明内容

本发明的目的在于利用分子标记技术，提供一种用于猕猴桃‘东红’品种鉴定的分子标记引物，所述的分子标记命名为Geo19-159，针对其设计的引物为Geo19-159-F:TGATTCGTTTTGACACAATGG和Geo19-159-R:TGCAGGCTATGGACTGAGTG。

本发明的另一个目的在于提供了用于猕猴桃‘东红’品种鉴定的分子标记引物在猕猴桃育种中的应用。

为了达到上述目的，本发明采取以下技术措施：

用于猕猴桃‘东红’品种鉴定的分子标记引物的获得：申请人从猕猴桃基因组序列网站(http://bioinfo.bti.cornell.edu/kiwi)下载‘红阳’猕猴桃全基因序列。通过SSRFinder软件在全基因组范围内开发SSR标记，根据基因结构注释结果，选择基因位点设计SSR标记引物。利用设计合成的引物，对猕猴桃‘东红’品种进行PCR扩增，筛选得到分子标记Geo19-159，针对其设计的引物为Geo19-159-F:TGATTCGTTTTGACACAATGG和Geo19-159-R:TGCAGGCTATGGACTGAGTG。