[发明专利]一种人CYR61蛋白Ser188位点磷酸化抗原、抗体及其制备方法和应用

说明书

本发明公开一种人CYR61蛋白Ser188位点磷酸化抗原、抗体及其制备方法和应用，涉及抗体及其制备技术领域。所述抗体是通过SEQ ID NO：1所示的活性氨基酸序列为抗原肽免疫动物制备得到的。本发明提供的磷酸化抗体有助于研究介导其发生磷酸化作用的激酶，探讨CYR61蛋白的多种生物学功能；实际应用中便于研究人CYR61蛋白特定位点磷酸化修饰在特定生物学事件或疾病发生发展过程中的作用机制，亦可用于检测用药后肿瘤相关蛋白表达的差异，为临床肿瘤疾病的诊断与治疗提供潜在的作用靶点。

技术领域

本发明涉及抗体及其制备技术领域，特别涉及一种特异性针对人CYR61蛋白Ser188位点磷酸化抗原、抗体及其制备方法和应用。

背景技术

CCN家族由6个拥有相似功能区的蛋白组成，CYR61是该家族中第一个被发现的蛋白。该家族蛋白一直以来被认为是分泌蛋白，并作为细胞基质蛋白被深入研究。CCN家族蛋白在细胞内合成，并在信号肽的引导下分泌到细胞外，它们在肿瘤发生和发展中伴随着肿瘤内外环境的一系列改变，可在细胞内和细胞外起作用。该家族蛋白参与了细胞粘附、分裂、迁移、耐药、存活、分化、血管生成、纤维化、骨骼生成和创伤愈合等生理过程，其中的很多现象与肿瘤相关。CYR61(CCN1)、CTGF(CCN2)、CCN5基因敲除小鼠往往死于胚胎期或出生早期。

CYR61在肿瘤中所表现的生物学功能是多样的，并且在不同的肿瘤组织细胞中，CYR61的功能也不尽相同。CYR61mRNA高表达于恶性乳腺肿瘤细胞，还能促进胃腺癌细胞RF-1细胞恶化；同时CYR61在卵巢癌中高表达，并且和淋巴结转移正相关。然而CYR61在肺癌、平滑肌瘤中的表达水平却明显降低，作为肿瘤抑制因子发挥着重要作用。例如，在非小细胞肺癌中CYR61的表达低于癌旁正常肺组织，并与肺癌病理类型、淋巴结转移等因素相关。

目前研究表明：CYR61蛋白主要与肿瘤细胞的增殖和迁移、肿瘤细胞的生长调节和肿瘤血管形成有关，其作用机制可通过相关的信号通路来完成。在组织中CYR61过表达也可以促进其受体AVβ3的表达，形成“CYR61-ACβ3自分泌调节环路”，产生细胞的生长和抗凋亡信号。在乳腺癌中，HRG通过CYR61上调AVβ3的水平，CYR61与AVβ3结合激活ERK1/ERK2MAPK信号通路，抑制P53的聚集，产生抗紫杉醇耐药作用。在神经胶质瘤细胞中，CYR61通过整联蛋白偶联激酶(ILK)使糖原合成激酶-3β(GSK3-β)磷酸化，激活β-catenin/LEF通路，从而促进细胞增殖基因的表达，CYR61还可通过激活PI3K/AKT信号通路促使凋亡蛋白Bad活性降低，促进细胞生长和迁移。在肺癌中，CYR61作为肿瘤抑制因子发挥着重要作用。在体外实验中，CYR61导致G₀/G₁期的阻滞，可以抑制肺癌细胞的生长。

磷酸化、泛素化等翻译后修饰在细胞信号通路介导的生理和病理过程中发挥着关键作用。鉴于CYR61在肿瘤发生和发展过程中发挥的重要作用，因而进一步研究CYR61蛋白的翻译后修饰具有重要意义。我们前期研究发现，CYR61氨基酸序列中的Ser188位点是其蛋白磷酸化修饰的位点，在调控CYR61蛋白自身进行中可能具有重要的作用。抗体是蛋白质功能研究的重要工具，已被广泛用于肿瘤等疾病诊断、治疗等临床应用中，因而一种特异识别人CYR61的Ser188磷酸化位点的抗体有待于进一步的开发。

发明内容

为了解决CYR61蛋白磷酸化修饰有效研究的问题，为此，本发明的首要目的在于提供一种特异性针对人CYR61蛋白Ser188位点磷酸化抗原肽。

本发明的另一目的在于提供一种特异性针对人CYR61蛋白Ser188位点磷酸化抗体。

本发明的另一目的在于提供上述抗原肽和抗体的应用。

本发明的再一目的在于提供上述抗体的制备方法。

本发明的目的通过下述技术方案实现：