[发明专利]一种测定青蒿素含量的荧光分析方法

说明书

本发明属于光谱分析检测技术领域，特别是涉及一种运用新型纳米材料石墨烯量子点的荧光分析法，具体涉及一种测定青蒿素含量的荧光分析方法。本发明利用青蒿素的过氧桥结构，同对氨基苯硼酸反应，在氧气存在时，进一步进行催化氧化反应生成对亚氨基苯醌，并猝灭石墨烯量子点的荧光。本发明提供的荧光检测方法成本低，易操作，检出限低，选择性好，灵敏度高。本发明拓展了石墨烯量子点在药物分析检测领域中的应用，同时对于青蒿素药品质量的评价和监督提供了便捷、精确的技术手段。

技术领域

本发明属于光谱分析检测技术领域，特别是涉及一种运用新型纳米材料石墨烯量子点的荧光分析法，具体涉及一种测定青蒿素含量的荧光分析方法。

背景技术

青蒿素是一种含过氧基团的倍半萜内酯类化合物，是继乙氨嘧啶、氯喹、伯喹之后的最安全有效的抗疟特效药，具有速效和低毒的特点。同时，青蒿素在抗血吸虫、调解或抑制体液的免疫功能、提高淋巴细胞的转化率的治疗中也显示出优良的前景。随着青蒿素在生化医药领域的广泛应用，青蒿素的市场需求迅速扩大，给不法商贩提供可乘之机，兜售假冒或劣质的青蒿素产品，给患者带来恶劣的影响，同时也侵犯了青蒿素提取厂商的利益。因此，建立一种有效、便捷、高灵敏的定量检测青蒿素的方法尤为重要。

目前，青蒿素的检测方法包括色谱分析法、光谱分析法、电化学法、生物学方法等。色谱法如高效液相色谱法，虽然准确度高，但操作复杂，中国专利 (CN 103353498 A) 公布了一种测定青蒿素浸膏中青蒿素含量的高效液相色谱法，该方法中反相色谱柱的填充物为十八烷基硅烷键合硅胶，较其他液相色谱法相比灵敏度和准确度更高，但该方法成本昂贵，仪器设备要求高，操作繁琐；生物学方法如光度酶联免疫分析法、放射免疫分析法，成本高，反应条件苛刻；电化学法检测青蒿素极易受组织中杂质的干扰，重复性很差；而光谱法由于所用仪器设备简单，灵敏度高，实用性及可操作性强，满足现代社会对分析的需求而倍受青睐。中国专利 (CN 105784620 A) 公开了一种紫外光谱法检测青蒿素的分析方法，该方法以单链 DNA 稳定的纳米金胶体为探针，通过青蒿素与亚铁离子反应生成的自由基来破坏DNA 单链，从而使纳米金胶体的紫外吸收发生变化来构建青蒿素的传感平台，显著提高了检测方法的灵敏度，但该方法中所用 DNA 价格昂贵，而且该方法检出限较高。

近年来，石墨烯量子点成为新型纳米材料家族中不可或缺的一员。石墨烯量子点具有优良的热化学稳定性、良好的生物兼容性及低细胞毒性，因而在生物成像、传感器和光学分析检测中备受关注。现有技术中，将石墨烯量子点应用到青蒿素检测中的研究尚未有相关报道。

发明内容

本发明的目的在于克服当下青蒿素检测过程中存在的操作复杂、成本昂贵等问题，提供了一种基于新型纳米材料石墨烯量子点建立的测定青蒿素含量的荧光分析方法，该方法利用石墨烯量子点独特的性质以及青蒿素特殊的过氧桥结构构建了一个简便灵敏的检测体系，实现了对青蒿素的定量检测。

本发明为了实现上述目的所采用的技术方案为：

本发明提供了一种测定青蒿素含量的荧光分析方法，包括以下步骤：

(1) 向A离心管中加入待检测青蒿素溶液，然后依次加入对氨基苯硼酸溶液、氢氧化钠的乙醇水溶液，混合均匀，室温下反应后得溶液A；

(2) 向步骤 (1) 中得到的溶液A加入酪氨酸酶溶液，反应得溶液B；

(3) 向步骤 (2) 中得到的溶液B加入荧光石墨烯量子点，混合均匀，反应得溶液C；

(4) 向B离心管中加入与步骤 (3) 中等量的石墨烯量子点；

(5) 向A、B两离心管中加入缓冲溶液使两试管溶液体积一致；

(6) 通过荧光分光光度计测定溶液A、B的荧光强度值 ：F_A、F_B；