[发明专利]一种重组质粒、DNA疫苗及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种特异性治疗IBD的重组质粒、DNA疫苗及其制备方法和应用。本发明的实验过程中，经DNA疫苗给药的治疗组的IBD模型小鼠的结肠黏膜损伤程度明显降低，肠炎疾病活动指数评分低于模型组，而模型组肠道促炎症因子TNF‑α、IL‑6增加，CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺的T细胞低于pVAX1‑TNFAIP3治疗组。同时，治疗组相关蛋白的磷酸化水平显著低于模型组，表明pVAX1‑TNFAIP3可以通过抑制相关炎症信号通路的活化，抑制炎症的发生；另外，结肠内Foxp3蛋白上调，表明pVAX1‑TNFAIP3可通过上调调节性T细胞的增加来抑制炎症的发生。这些都证实了pVAX1‑TNFAIP3重组质粒及制得的DNA疫苗对炎性肠病具有良好的治疗效果。

技术领域

本发明涉及基因工程领域，特别涉及一种重组质粒、DNA疫苗及其制备方法和应用。

背景技术

炎性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)是一种常见的慢性非特异性肠道疾病，根据临床和病理学特点分为两类：溃疡性结肠炎(ulcerativecolitis,UC)和克罗恩病(Crohn’s disease,CD)。近年来，随着人民生活水平的提高和环境的污染，IBD发病率和患病率在我国呈明显增长趋势，严重影响患者生活和工作，给社会、经济带来巨大负担。IBD的病因目前尚未明了，一般认为与遗传易感性、免疫炎症、肠道菌群和精神心理因素等有关。其中，发病机制的关键可能是免疫系统针对肠道菌群及食物抗原的异常免疫反应，导致大量的炎性因子在肠道局部聚集引起的炎症损伤。

IBD目前的治疗药物包括水杨酸制剂、糖皮质激素及一些免疫抑制剂类药物，但缺乏特异性的治疗手段，因此寻找新的治疗手段已经成为了国内外研究的热点和难点。

发明内容

本发明的目的是提供一种特异性治疗IBD的重组质粒、DNA疫苗及其制备方法和应用。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

一种重组质粒，包括TNFAIP3基因和真核表达载体pVAX1，所述TNFAIP3基因的GenBank登录号为KJ892292.1。

上述重组质粒的制备方法，具体步骤如下：将包含TNFAIP3基因的片段插入到载体pVAX1的EcoR Ⅰ和EcoR V酶切位点间。

上述重组质粒在制备预防和治疗炎性肠病的药物中的应用。

一种DNA疫苗，包括上述重组质粒。

优选的，该DNA疫苗为多相乳液。

优选的，还包括聚乳酸-羟基乙酸共聚物、聚乙烯醇。

一种DNA疫苗的制备方法，具体步骤如下：

取聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶于有机溶剂中，形成有机相；

取上述重组质粒的溶液，与所述有机相混合形成乳液；

将该乳液与聚乙烯醇水溶液混合，形成多相乳液。

通过该制备方法得到的W1/O/W2型多相乳液可以直接用于结肠给药，直接作用于IBD病理部位，无需肌肉注射。

优选的，该多相乳液加入去离子水，待有机溶剂挥发后，离心，收集沉淀。

上述方法制得的DNA疫苗。

上述DNA疫苗在制备预防和治疗炎性肠病中的应用。

本发明的有益效果是：