[发明专利]一种膜组合精制两性生物碱的方法

说明书

一种膜组合精制两性生物碱的方法，该发明提供了一种新颖的两性生物碱分离方法，针对两性生物碱物化性质与中药中生物碱、酚酸、皂苷等成分的差异，调节成分存在状态，引入有机溶剂强化或削弱与纳滤膜之间的作用力，放大两性生物碱与其他成分在纳滤作用力的差异性，从而实现目的性精制两性生物碱。该发明快速实现复杂成分环境中两性生物碱的富集，且分离过程中对热敏性成分无影响，同时避免因色谱分离产生的有机试剂带来的环境污染，降低能耗、节约制药企业生产成本。

技术领域

本发明涉及一种两性生物碱精制方法，具体涉及一种基于生物碱类成分物化特征采用膜组合技术精制两性生物碱成分，属于医药领域。

背景技术

生物碱存在于自然界(主要为植物，但有的也存在于动物)中的一类含氮的碱性有机化合物，多具有碱性。两性生物碱相较于常规的生物碱，结构中多具有羧基或酚羟基，在具有碱性的同时也具有酸性化合物的物化性质。

中药成分复杂多样，有黄酮、皂苷、生物碱、酚酸、鞣质、蛋白、多糖、无机离子等，在对生物碱类成分富集时多采用制备色谱、离子交换树脂、硅胶柱层析等，上述富集技术均存在一定的技术缺陷，制备色谱可以得到相对纯度较高的目标成分，但是富集效率和成本偏高，以及后续富集部位溶液回收处理，也会引起成分转变转化；离子交换树脂以及层析色谱，分离效率低下，以及用于生物碱类成分洗脱的三氯甲烷、甲苯等有机溶剂，不仅对操作人员带来伤害，对环境也造成污染。如何能够在常温或低温条件下对酸碱两性生物碱进行富集，减少有机溶剂污染，提高精制效率，是医药行业迫切需要解决的科学技术难题。

膜分离技术是借助膜孔径的分子切割实现分离，具有简便、高效、无热效应等优势，在对样品过滤时，可针对性的去除大分子物质，保留小分子成分，但是膜分离技术的选择性较差。本发明在研究之初进行了生物碱类成分在不同溶液环境、解离状态下的分离行为研究，偶然发现在较低浓度有机溶剂环境下，可以强化解离态生物碱的截留效率，两性生物碱的解离行为与溶液的相关性与中药其他类成分存在明显区别，从而目的性实现酸碱两性生物碱的目标的性精制富集。

基于上述背景，提供一种对常温化、低污染、低耗能、低周期的两性生物碱的精制方法，保留其原成分结构，有助于成分纯化及新药研发的相关工作的开展。

发明内容

发明目的：本发明的目的是提供一种膜组合精制两性生物碱的方法，可用于快速分离复杂成分体系中两性生物碱的富集。

技术方案：

一种膜组合精制两性生物碱的方法，其特征在于：包含以下步骤：

a.检测待分离两性生物碱的等电点，并计算其两性生物碱化合物结构中酸性基团呈解离态时的pH，以及碱性基团程解离态时的pH；b.将待分离提取物溶于纯化水，采用截留分子量10KDa～100KDa超滤膜进行预处理去除大分子蛋白、多糖，收集超滤液；c.将步骤b超滤液采用水溶性有机溶剂逐步稀释至溶液中含水溶性有机溶剂量达到5％～40％，进而采用1％～10％质量浓度的氢氧化钠水溶液调节pH至步骤a中碱性基团解离的pH，采用截留分子量100Da～800Da纳滤膜分离，待截留液体积无法持续分离时，纯化水稀释截留液，重复1～3次后，待截留液体积无法持续分离时收集终端截留液；d.将步骤c中的终端截留液采用水溶性有机溶剂逐步稀释至溶液中含水溶性有机溶剂量达到5％～40％，采用1％～10％质量浓度的盐酸水溶液调节pH至步骤a中酸性基团解离的pH，采用截留分子量100Da～800Da纳滤膜分离，待截留液体积无法持续分离时，纯化水稀释截留液，重复1～3次后，待截留液体积无法持续分离时收集截留液，即得两性生物碱部位。

所述的一种膜组合精制两性生物碱的方法中的超滤膜材质为纤维素、聚醚砜、醋酸纤维素中的一种。

所述的一种膜组合精制两性生物碱的方法中的水溶性有机溶剂为甲醇、乙醇、乙腈、四氢呋喃中的一种。

所述的一种膜组合精制两性生物碱的方法中的纳滤膜材质为耐有机溶剂材质聚酰亚胺、聚酰胺、聚丙烯腈中的一种。