[发明专利]一种C反应蛋白全程检测的方法以及相应的试剂盒

权利要求书

1.一种C反应蛋白全程检测试剂盒，其包含：

M试剂，含有0.5～1mg/mL的包被了第一抗体的磁性微粒、0.04～0.06％(w/v)表面活性剂和8～12％(w/v)蔗糖，溶剂为pH＝7.0～8.0的磷酸盐缓冲液；其中第一抗体的包被量为5～20μg/mg磁性微粒，所述表面活性剂为吐温20；

R1试剂，即样品处理液，浓度为0.5M的柠檬酸溶液，pH＝3.0～4.0；

R2试剂，含有包被了第二抗体的吖啶酯、0.5～1％酪蛋白和0.5～1％牛血清白蛋白，溶剂为pH＝7.0～8.0的磷酸盐缓冲液，其中第二抗体的包被量为0.3-0.9μg/μg吖啶酯；

预激发液和激发液；

所述第一抗体和第二抗体均为能与C反应蛋白特异性反应的单克隆抗体，所述第一抗体和第二抗体针对不同的表位。

2.一种C反应蛋白全程检测试剂盒，其包含：

包被第一抗体的平底板式化学发光板，其中第一抗体的包被量为100～500ng/孔，包被缓冲液为pH＝7.0～8.0的磷酸盐缓冲液，封闭液为5-8％(w/v)封闭血清或封闭蛋白质和0.02％(w/v)叠氮化钠、pH值为7.2-7.4的50mM磷酸缓冲液；

样品处理液，浓度为0.5M的柠檬酸溶液，pH＝3～4；

标记酶液，含有标记了辣根过氧化物酶或者碱性磷酸酶的第二抗体，标记量为第二抗体1mg/mL，与辣根过氧化酶或者碱性磷酸酶同比例标记；

显色液：当标记酶为辣根过氧化酶时，显色液包括显色A液和显色B液，显色A液为过氧化氢，其中显色A液的配方：醋酸钠13.6g，柠檬酸1.6g，30％双氧水0.3ml，蒸馏水配制至500ml，显色B液为邻苯二胺，其中显色B液的配方：乙二胺四乙酸二钠0.2g，柠檬酸0.95g，甘油50ml，9.15g四甲基联苯胺，蒸馏水配制至500ml；当标记酶为碱性磷酸酶时，显色液为市售试剂；

所述第一抗体和第二抗体均为能与C反应蛋白特异性反应的单克隆抗体，所述第一抗体和第二抗体针对不同的表位。

3.权利要求2所述的试剂盒，其中发光板为96孔或384孔的发光板，第一抗体的包被量为500ng/孔，封闭血清为小牛血清。

4.权利要求1至3中任一项所述的试剂盒，其中柠檬酸的pH是通过十二水磷酸氢二钠调节。

5.权利要求1至3中任一项所述的试剂盒，其中柠檬酸的pH为3.0-3.5。

6.权利要求5所述的试剂盒，其中柠檬酸的pH为3.2、3.3、3.4或3.5。

7.权利要求1至3中任一项所述的试剂盒，其中预激发液为1％(w/v)过氧化氢溶液，激发液为1mol/L氢氧化钠溶液。

8.权利要求1至3中任一项所述的试剂盒，其中第一抗体为10C11，第二抗体为14D9-2。

9.权利要求1所述的试剂盒，其中：

所述M试剂的制备方法：将所述第一抗体与磁性微粒混合于pH＝5.0～6.0的2-吗啉乙磺酸缓冲液中，于25-37℃包被1-3h，加入pH＝8.0～9.0的0.1％～0.5％(w/v)牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液终止1～3h，将其中包被后的磁珠微粒分离后分散于pH＝7.0～8.0的磷酸盐缓冲液中，再加入0.04～0.06％(w/v)表面活性剂和8～12％(w/v)蔗糖，所述表面活性剂为吐温20，即得M试剂；

所述R2试剂的制备方法：将所述第二抗体与吖啶酯混合于pH＝8.0～9.0的磷酸盐缓冲液中，于25-37℃包被1～3h，再加入pH＝8.0～9.0的含有0.1％～0.5％(w/v)牛血清白蛋白的Tris缓冲液终止1～3h，得到母液，母液用pH＝7.0～8.0的磷酸盐缓冲液稀释至1:100～500，即得R2试剂。

10.权利要求9所述的试剂盒，其中表面活性剂为0.05％(w/v)吐温20，蔗糖为10％(w/v)蔗糖。