[发明专利]一种发酵制备赖氨酸的工艺

权利要求书

1.一种发酵制备赖氨酸的工艺，其包括如下步骤：

将谷氨酸棒状杆菌种子液按照5-10％的接种量接种至含有发酵培养基的发酵罐中，进行好氧发酵，发酵温度为32-35℃，罐压为0.05MPa，发酵48-60小时得到发酵液，发酵过程中持续加氯化铵作为发酵液中和剂。

2.根据权利要求1所述的工艺，其特征在于，所述谷氨酸棒状杆菌种子液按照如下步骤制备而得：将谷氨酸棒状杆菌接入种子培养基中，培养至密度为（3-5）×10⁸cfu/mL的谷氨酸棒状杆菌种子液；所述种子培养基的组分为：葡萄糖80g/L，酵母膏30g/L，玉米浆10g/L，磷酸二氢钾2g/L，磷酸氢二钾2g/L，七水硫酸亚铁0.2g/L，七水硫酸镁0.2g/L，生物素10mg/L，维生素B₁ 2mg/L。

3.根据权利要求1或2所述的工艺，其特征在于，所述发酵培养基的制备方法包括如下步骤：

步骤1）将小麦秸秆破碎，然后与麦麸按照2：3的质量比混合，再粉碎至粒径为50目，然后添加到4-5倍重量的水中，以200rpm的搅拌速度边搅拌边升温至60℃，保温条件下，超声处理20-30min，超声功率为500W，然后121℃蒸汽处理10min，自然冷却至室温，即得复合物；

步骤2）将绿色木霉种子液和地衣芽孢杆菌种子液按照1-2:2-3的体积比混合，得到混合接种液，将混合接种液按照6-8%的接种量接入到含有步骤1）所得复合物的发酵罐中进行培养，温度为30℃，培养时间为72-96h，得到培养液；

步骤3）超声处理培养液，超声时间为30-60min，超声功率为500W，再调整温度为55℃，加硫酸调整pH为6，分别加入溶菌酶和酸性蛋白酶，溶菌酶的添加量为2万U：1L溶液，酸性蛋白酶的添加量为1万U：1L溶液，保温条件下，酶解12-24小时，然后过滤，收集滤过液，100℃灭酶5min，自然冷却至室温，再添加相同体积的水、适量乙酸钙和甘露醇，搅拌均匀，121℃蒸汽处理5min，自然冷却至室温，即得发酵培养基。

4.根据权利要求3所述的工艺，其特征在于，所述绿色木霉种子液的制备方法为：将绿色木霉划线接种在PDA培养基上培养，得到单菌落；挑取单菌落接种到PDA液体培养基进行培养，得到绿色木霉种子液。

5.根据权利要求3所述的工艺，其特征在于，所述地衣芽孢杆菌种子液的制备方法为：将地衣芽孢杆菌接种到LB固体培养基上培养，得到单菌落；挑取单菌落接种到LB液体培养基上进行培养，得到地衣芽孢杆菌种子液。

6.根据权利要求3所述的工艺，其特征在于，所述乙酸钙的添加量为100-200mg/L 。

7.根据权利要求3所述的工艺，其特征在于，所述甘露醇的添加量为50-100mg/L。