[发明专利]利用碱基编辑技术实现基因敲除的方法及其应用

权利要求书

1.一种利用碱基编辑实现hFANCF基因敲除的方法，包括：

选定待敲除基因编码区的20bp –NGG目标序列，使其包含完整的目标密码子CAA、CAG或CGA；

利用sgRNA序列来将h-PHRBN-BE定位到目标序列以使目标密码子中的目标单碱基C变成T从而相应引入终止密码子TAA、TAG或TGA以实现基因敲除，

其中，PHRBN是来自人的碱基编辑酶APOBEC-3A，通过将PHRBN融合到切口酶形式的Cas9核酸酶D10A的N端而靶向位点为目标序列的第3-8位的目标单碱基C，

所述h-PHRBN-BE选自：

PHRBN-spCas9-UGI-NLS, SEQ ID NO.2；或

PHRBN-xCas9-UGI-NLS，SEQ ID NO.3，

所述sgRNA序列为与目标序列互补对应的20bp序列并选自：

Sg-1: GGCAAGAGGGCGGCTTTGGGCGG，SEQ ID NO.11；

Sg-2: GCAGCAACTCTTTCCCGGCCCGGG，SEQ ID NO.12；或

Sg-3: GCCCCAAGAAGAGTTGGAACCCGG，SEQ ID NO.13。

2.一种用于hFANCF基因敲除的试剂盒，包括权利要求1中所述的sgRNA、h-PHRBN-BE以及扩增试剂。