[发明专利]一种检测转基因植物中目的基因表达的通用引物及检测方法有效
申请号: | 201810636371.7 | 申请日: | 2018-06-20 |
公开(公告)号: | CN108624709B | 公开(公告)日: | 2020-11-17 |
发明(设计)人: | 王喜庆;刘芳;庄军红 | 申请(专利权)人: | 中国农业大学 |
主分类号: | C12Q1/6895 | 分类号: | C12Q1/6895;C12Q1/6851;C12N15/11 |
代理公司: | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人: | 关畅;白艳 |
地址: | 100094 *** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 检测 转基因 植物 目的 基因 表达 通用 引物 方法 | ||
1.一种检测转基因植物中导入的外源目的基因是否表达的方法,为检测所述转基因植物的cDNA中是否含有序列1第1-93位所示的DNA片段,若含有,则该转基因植物表达或候选表达目的基因;若不含有,则该转基因植物不表达或候选不表达目的基因;
所述检测所述转基因植物的cDNA中是否含有序列1第1-93位所示的DNA片段的方法为以所述转基因植物的cDNA为模板,用引物对进行荧光定量PCR扩增,得到待测转基因植物PCR扩增产物;检测所述待测转基因植物PCR扩增产物,若有S曲线或S扩增曲线或2-ΔCt值大于0,则该转基因植物的cDNA中含有序列1第1-93位所示的DNA片段;若无S扩增曲线或2-ΔCt值小于等于0,则该转基因植物不含序列1第1-93位所示的DNA片段;
所述引物对由序列2所示的单链DNA分子和序列3所示的单链DNA分子组成;
所述转基因植物为将所述外源目的基因导入野生型植物中得到的植物,且所述外源目的基因的终止子为NOS终止子或至少含有序列1所示核苷酸的NOS终止子部分序列。
2.一种检测转基因植物中导入的外源目的基因是否表达的方法,包括如下步骤:
1)提取待测转基因植物的RNA,再反转录得到cDNA;
2)以所述cDNA为模板,用引物对进行荧光定量PCR扩增,得到待测转基因植物PCR扩增产物;
所述引物对由序列2所示的单链DNA分子和序列3所示的单链DNA分子组成;
检测所述待测转基因植物PCR扩增产物,若该扩增产物具有S曲线或S扩增曲线或2-ΔCt值大于0,则该转基因植物表达或候选表达该外源目的基因;若该扩增产物不具有S曲线或2-ΔCt值小于等于0,则该转基因植物不表达或候选不表达该外源目的基因;
所述转基因植物为将所述外源目的基因导入野生型植物中得到的植物,且所述外源目的基因的终止子为NOS终止子或至少含有序列1所示核苷酸的NOS终止子部分序列。
3.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于:所述植物为双子叶植物或单子叶植物。
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