[发明专利]一种快速识别谷胱甘肽的荧光探针及其制备方法

说明书

本发明公开了一种快速识别谷胱甘肽的荧光探针及其制备方法，该种荧光探针通过具有较强吸电子能力的2，4‑二硝基苯磺酰基识别基团和氮杂环丁烷基能够与谷胱甘肽快速反应，同时具有较强荧光性的萘啶类衍生物，可以生成具有强荧光性的反应产物，灵敏度高，响应速度快；由于该荧光探针具有较强的抗干扰能力，能够特异性识别谷胱甘肽，适用于各种干扰强度较大样品的谷胱甘肽检测。

技术领域

本发明涉及化学分析技术领域，具体涉及一种快速识别谷胱甘肽的荧光探针及其制备方法。

背景技术

谷胱甘肽（GSH）是一种含γ-酰胺键和巯基的三肽，由谷氨酸、半胱氨酸及甘氨酸组成。存在于几乎身体的每一个细胞。谷胱甘肽能帮助保持正常的免疫系统的功能，并具有抗氧化作用和整合解毒作用，半胱氨酸上的巯基为其活性基团，易与某些药物（如扑热息痛）、毒素（如自由基、碘乙酸、芥子气，铅、汞、砷等重金属）等结合，而具有整合解毒作用。谷胱甘肽具有广谱解毒作用，不仅可用于药物，更可作为功能性食品的基料，在延缓衰老、增强免疫力、抗肿瘤等功能性食品广泛应用。

谷胱甘肽广泛存在于动、植物中，在生物体内有着重要的作用。在面包酵母、小麦胚芽和动物肝脏中的含量很高，达100～1000mg/100g，在人体血液中含26～34mg/100g，鸡血中含58～73mg/100g，猪血中含10～15mg/100g，在西红柿、菠萝、黄瓜中含量也较高（12～33mg/100g），而在甘薯、绿豆芽、洋葱、香菇中含量较低（0.06～0.7mg/100g）。

谷胱甘肽不仅是衡量人类健康程度的一个标准，同时其在自然界中的含量也可为人类的获取提供的方向性，所以，对谷胱甘肽的识别检测技术越来越被人们关注，由于荧光探针的识别技术具有简单、快捷的优点，所以急需一种对谷胱甘肽响应速速快、抗干扰强的荧光探针。

发明内容

本发明的目的在于，针对上述现有技术的不足，提出一种快速识别谷胱甘肽的荧光探针，该种荧光探针在检测过程中对谷胱甘肽的响应速度较快以及很好的抗干扰性，进而大大的提高了该种荧光探针的适用范围。

本发明提出一种快速识别谷胱甘肽的荧光探针，通过与谷胱甘肽反应，生成具有强荧光性的反应产物，其特征在于，具有如下所示的结构式：

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本发明的荧光探针由于含有吸电子的2，4-二硝基苯磺酰基识别基团，对谷胱甘肽具有特异选择性识别，使荧光探针处于荧光淬灭状态。当荧光探针检测到谷胱甘肽时，谷胱甘肽首先亲核进攻识别基团，并发生苯醚键断裂，得到具有强荧光的反应产物，通过监测产物的荧光强度，可以实时检测谷胱甘肽的浓度。

由于2，4-二硝基苯磺酰识别基团具有较强的吸电子能力，同时由于在本发明的荧光探针一侧具有氮杂环丁烷基，其对整个共轭体系的电子云密度发生变化，使苯醚键断裂速度较快，所以在检测谷胱甘肽时，本发明提供的荧光探针快速识别谷胱甘肽，具有较短的响应时间；同时本荧光探针具有萘啶类衍生物结构，萘啶类衍生物的发射波长在近红外区域，而且具有较大的Stokes位移。因此就荧光性能来说，是一种非常理想的荧光基团。斯托克斯位移大（225nm），具有很强的抗干扰能力，进而对谷胱甘肽识别针对性较强，从而达到灵敏度高、响应速度快的特点。

由于本发明的荧光探针具有较强的抗干扰能力和响应速度，所以可以适用于干扰性较强的样品检测。

进一步的，所述反应产物的激发波长为350nm～360nm。 该反应产物在355nm处具有最大激发波长。

进一步的，一种快速识别谷胱甘肽的荧光探针的制备方法，包括以下步骤：

(1)、将2，7-萘啶-1(2H)-酮与三溴氧磷的反应物经过萃取、干燥、分离纯化，制得中间体A；

(2)、将步骤(1)的中间体A与甲基硼酸和碳酸氢钠发生反应，得到中间体B；