[发明专利]产2;5-呋喃二甲酸重组基因工程菌的构建方法在审
| 申请号： | 201810641232.3 | 申请日： | 2018-06-21 |
| 公开（公告）号： | CN108841847A | 公开（公告）日： | 2018-11-20 |
| 发明（设计）人： | 不公告发明人 | 申请（专利权）人： | 徐州奥格曼新材料科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/60;C12P17/04 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 221000 江苏省徐州市黄河*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 呋喃二甲酸 构建 重组基因工程菌 甘油脱水酶基因 大肠杆菌表达 微生物法制备 发酵产物 杆菌基因 深度发酵 培养基 重组DNA 工程菌 梭菌属 得率 果糖 整合 修饰 合成 基因 | ||
【权利要求书】：
1.本发明涉及产2,5-呋喃二甲酸重组基因工程菌的构建方法，包括：
（1）是将梭菌属甘油脱水酶基因gldABC，整合进土生克雷伯杆菌基因dhaβ,形成重组DNA基因gldha；
（2）通过PCR扩增，并经修饰后插入大肠杆菌表达载体pTE28aT7，构建2,5-呋喃二甲酸工程菌pTE28aT7-gldha；
（3）在含有果糖的限制培养基中，经深度发酵合成2,5-呋喃二甲酸。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于梭菌属甘油脱水酶基因gldABC和土生克雷伯杆菌基因dhaβ,进行重组形成重组DNA基因gldha。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于PCR扩增条件为：97℃预变性10min，94℃变形60s，58℃退火30s，72℃延伸60-120s，30个循环后72℃延伸10min。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于在含有果糖的限制培养基中，经深度发酵合成2,5-呋喃二甲酸。
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