[发明专利]E3泛素连接酶ASB3在制备肝癌治疗药物中的应用

说明书

本发明涉及生物医药领域，具体是E3泛素连接酶ASB3作为抗肿瘤新靶点在制备肝癌治疗药物中的应用。本发明通过小干扰RNA特异性下调ASB3，提供了一种新的肝癌治疗方式。干扰ASB3能够抑制肝癌细胞的增殖活力，诱导肝癌细胞凋亡；对裸鼠皮下肝癌种植瘤具有治疗作用；解决了中晚期肝癌现有治疗方式疗效差、预后不佳等技术问题。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体地说，是E3泛素连接酶ASB3作为抗肿瘤新靶点在肝癌治疗中的应用。

背景技术

肝癌是常见的恶性肿瘤，在全球范围内有着较高的发病率。长期以来肝癌的发病和死亡水平居高不下，对居民生命健康造成了极大的危害。GLOBOCAN2012年统计报告显示：世界肝癌2012年发病达782451例，占同期世界癌症总发病数的5.6％，世界标化发病率(ASR-W)为10.1/10万，分别居同期世界男、女性和合计癌症发病顺位的第5、9及7位；中国发病384770例，占同期中国癌症发病总数的12.9％，ASR-W为22.3/10万，分别居同期中国男、女性及合计癌症发病顺位的第2、5和2位。中国的肝癌发病率分别是世界、发达地区及亚洲的2.21、4.13和1.68倍。

原发性肝癌分为肝细胞肝癌(HCC)、胆管细胞癌(CC)及混合型肝癌，其中HCC占85％～90％，是最常见的病理类型。目前认为HCC的发病是由遗传和环境因素相互作用引起的，是一个多因素诱导、多基因参与的复杂过程。其中，乙肝病毒(HBV)慢性持续性感染是我国最重要的肝癌发病危险因素。

目前，早期肝癌的治疗方式主要以手术为主，由于肝癌发病隐匿，仅有不足30％的患者能够获得及时手术的机会，中晚期肝癌的治疗则侧重于非手术疗法。现有的肝癌非手术治疗方式主要有：血管介入治疗、分子靶向化疗药物治疗、放射治疗及局部消融治疗。鉴于我国肝癌病情的特点及各种治疗手段的局限性，尽管现有的各种治疗手段能够缓解患者的病情进展，对改善预后和提高生存率有一定帮助，但是目前对于肝癌的综合治疗仍未达成共识，对于肝癌治疗的长期疗效、并发症、适应症等仍然需要更多更深入的研究，亟待需要新型治疗方式攻克这一重大疾病。

泛素-蛋白酶体系统(UPS)是细胞内蛋白选择性降解的重要途径，由泛素激活酶E1、结合酶E2以及连接酶E3组成，参与调节细胞内多种生理活动，对细胞生命活动的正常运行至关重要。其中E3泛素连接酶主要负责特异性识别靶蛋白，在UPS系统中发挥了至关重要的作用。根据其结构特征，E3连接酶可分为HECT结构域家族、RING结构域家族(包括U-box结构域)两大类，其中Cullin-Ring-based E3-Ligases(CRLs)是一类重要的RING E3泛素连接酶，参与调节细胞周期蛋白、DNA复制蛋白、DNA损伤应答调控因子等多种底物蛋白的降解，其功能失调引起底物积聚，与肿瘤发生密切相关。

ASB3是组成CRL E3泛素连接酶复合体的重要底物识别蛋白。ASB3蛋白由C末端的SOCS-box及N末端的12个锚蛋白重复序列(Ankyrin repeat，ANK)组成，含有518个氨基酸。2型肿瘤坏死因子受体(TNF-R2)是ASB3已经明确的底物，ASB3通过其部分ANK与TNFR2结合并调控它的降解。此外，ASB3还可能通过调节其它底物的泛素化，进而调控细胞功能。

RNA干扰技术(RNAi)是把与内源mRNA编码区同源的小片段外源双链RNA导入细胞中，导致特定基因沉默的一种技术。siRNA是RNAi的关键效应分子，是长度为21-23nt的双链RNA。RNAi技术能够沉默或降低特异性基因的表达，产生类似基因敲除的效应。在一些疾病中，RNAi相关研究已进入I期和II期临床试验。这使得以一些与肿瘤发生发展密切相关的分子作为特异性靶点，通过RNAi技术使其沉默，能够达到抗肿瘤目的。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新的肝癌非手术治疗方式——使用小干扰RNA沉默特异性靶基因，这种治疗方式主要是为了解决传统的肝癌治疗方式疗效及预后不佳等问题。