[发明专利]RAA荧光法检测裂谷热病毒的引物探针组及试剂盒

说明书

本发明涉及RAA荧光法检测裂谷热病毒的引物探针组及试剂盒，属于分子生物学检测技术领域。本发明提供的RAA荧光法检测裂谷热病毒的引物探针组包括上游引物、下游引物和探针，所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述探针为在SEQ ID NO.3所示核苷酸序列的第28位碱基修饰荧光报告基团、第29位碱基替换为四氢呋喃残基和第30位碱基修饰淬灭基团的物质。本发明提供的引物探针组检测快速、准确、灵敏、操作简便，特异性达100％，能够在15min内完成对裂谷热病毒的检测。

技术领域

本发明涉及分子生物学检测技术领域，具体涉及RAA荧光法检测裂谷热病毒的引物探针组及试剂盒。

背景技术

裂谷热(Rift Valley fever，RVF)是由裂谷热病毒(Rift Valley fever virus，RVFV)引起的一种人兽共患病，是由节肢动物传播的发热性、急性传染病，主要通过蚊媒传播，也可通过气溶胶和接触传播，主要宿主是绵羊、山羊和牛，其流行特征是妊娠动物出现出现急促流产，幼小动物的死亡率高，同时伴有人群的发病和死亡。该病流行于非洲和阿拉伯半岛地区，流行常伴随着特大降雨的周期循环，较少发生在半干旱地区，或者较频繁发生在较大雨量的草原地区，病变特征为肝损伤。WHO已将其列为生物战剂之一，世界动物卫生组织(OIE)将其列为A类疫病。

裂谷热病毒归属布尼亚病毒科白蛉热病毒属，有囊膜，呈球形，直径为90～100nm，表面有糖蛋白突起，其核酸位于病毒的核衣壳内，为单股负链RNA。裂谷热病毒为一种单一血清型的病毒，具有布尼病毒的典型形态学和理化特性。病毒有囊膜，直径90～110nm，呈球形，表面有清楚的糖蛋白突起，突起直径长10mm。病毒核酸位于病毒的核衣壳内，为单股负链RNA，RNA可分为L(大)、M(中)、S(小)三个节段。其中的S节段为双意义的RNA，即具有双定向编码功能，编码N蛋白和另外一种非结构蛋白(Ns)；M节段编码G1与G2两种外膜糖蛋白和两种非结构蛋白QNSm，大小分别为14kD和78kD)，G1和G2糖蛋白都能刺激机体产生抗体，但在体内只有G2能刺激机体产生中和抗体；L节段编码L蛋白，L蛋白具有病毒转录酶的功能。病毒粒子不含基质蛋白。该病毒只有一种血清型，目前还未发现裂谷热病毒的分离株和实验室传代株的特异性抗原差异。此病毒对脂溶剂和热敏感，56℃40分钟可灭活。

近年来，由于国际合作的加深，各国间贸易往来频繁，旅行者数量逐年递增，这些都增大了裂谷热传入我国的可能性。因此，在国境口岸建立该病毒的快速检验方法，并应用于口岸裂谷热病毒的监测工作，对防治该病传入我国具有重要意义。

目前诊断裂谷热病毒的方法有病毒分离法、血清学诊断法如血凝抑制试验、病毒中和试验以及酶联免疫吸附法。但是这些方法或是需操作活病毒，或是操作复杂、费时、费力，或是敏感度不够高，不能在早期得出诊断结果。近年来，发展起来的分子生物学方法如聚合酶链式反应(RT-PCR)以及等温核酸技术中的RT-LAMP法已经建立起来，并且在裂谷热病毒的检测上已得到较好的应用，大大缩短了检测的时间。以RT-PCR技术为代表如多重RT-PCR、RT-巢式PCR以及实时定量RT-PCR以其高度的特异性及敏感性在裂谷热病毒检测方面取得了重大的突破。但是这些方法需要使用复杂的仪器和装备精良的实验室。等温核酸技术中的RT-LAMP方法克服了RT-PCR技术需要昂贵的设备仪器等缺点，具有操作简便，结果判断简单等优点。但是，RT-LAMP技术要求多对引物且对靶基因的要求较高，假阳性率也比较高。

发明内容

本发明的目的在于提供RAA荧光法检测裂谷热病毒的引物探针组及试剂盒。本发明提供的引物探针组具有特异性强、灵敏度高、重复性好的特点，使用该试剂盒能在15min内检测出裂谷热病毒RNA。