[发明专利]一种中药复方中黄酮类化合物及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种中药复方中黄酮类化合物的制备方法，其特征在于，中药复方中黄酮类化合物的分子式为C₂₅H₂₆O₁₀，命名为芹菜素-7-丁烯-葡萄糖苷，化学结构式如式（I）所示：

（I）；

所述的中药复方中黄酮类化合物的制备方法，包括以下步骤：

（1）准备中药复方：

每一剂中药复方由白芨12 g、川芎9 g、甘草6 g、紫草15 g、丹参12 g、当归10 g、防风10 g、地骨皮12 g和透骨草6 g组成；

（2）提取：

将一剂中药复方在超纯水中煎煮后，收获中药水提液，减压浓缩后，用乙酸乙酯对浓缩液进行萃取，浓缩后得到乙酸乙酯提取物；

（3）粗分：

将乙酸乙酯提取物加入到超纯水中，并采用超声促进溶解，经大孔吸附树脂吸附后，依次用蒸馏水、20~30%乙醇、50~60%乙醇、70~80%乙醇和90~100％乙醇将样品从柱子上洗脱下来，收集70~80%乙醇洗脱部分，减压浓缩得到粗提物；

（4）精制：

将粗提物用甲醇溶解并过滤后，上样于Sephadex LH-20柱进行分离，分离过程中用40%甲醇-水溶液洗脱，并收集40%甲醇-水溶液洗脱馏分，低温存储备用；

（5）纯化：

经Sephadex LH-20柱分离产物，以硅胶拌样，经硅胶柱层析，然后以氯仿和甲醇体积比100:（1~25）的洗脱液梯度洗脱，进行分离，每份洗脱液均为一倍柱体积，流出液每4~5mL收集一份，保留第29~31份洗脱馏分，回收溶剂后溶解于甲醇溶液中，-4℃重结晶得到所述的芹菜素-7-丁烯-葡萄糖苷单体成分；

步骤（4）中，以0.22 µm滤膜过滤；分离采用的Sephadex LH-20柱长30 cm，内径1.5 cm；分离过程中，采用湿法上样，采用10%甲醇平衡色谱柱，上样体积占总体积的1%，洗脱液流速为1 mL/min；洗脱馏分在-20℃的低温下存储备用；

步骤（5）中，洗脱过程中，按照氯仿和甲醇的体积比为100:1、100：10、100：15、100：20和100：25的洗脱液依次洗脱。

2.根据权利要求1所述的中药复方中黄酮类化合物的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，超纯水的使用量为1~2L，煎煮过程中，浸泡时间为2~3h，熬制时间为3~4h，中药水提液的收获量为200~400mL，减压浓缩的温度为40~60℃，萃取过程中按浓缩液与乙酸乙酯的体积比1:（2~5）进行，并重复2~3次，浓缩前合并萃取液。

3.根据权利要求1所述的中药复方中黄酮类化合物的制备方法，其特征在于，步骤（3）中， 所述的超纯水的使用量为乙酸乙酯提取物总重量的15~20倍；大孔吸附树脂吸附过程中，乙酸乙酯提取物与树脂的质量比 1:（6~10）；减压浓缩温度为45℃。

4.根据权利要求1或3所述的中药复方中黄酮类化合物的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，大孔吸附树脂采用AB-8树脂。

5.根据权利要求1所述的中药复方中黄酮类化合物的制备方法，其特征在于，步骤（5）中，分离过程中，采用的色谱柱内径1.5 cm，柱内填料高30 cm，以氯仿和甲醇按体积比100:1的混合溶剂作为平衡硅胶柱的有机溶液，洗脱过程中保持1mL/min的恒定流速。