[发明专利]一种应用丹参SmTPS3基因合成多种倍半萜类化合物的方法有效
| 申请号： | 201810647877.8 | 申请日： | 2018-06-22 |
| 公开（公告）号： | CN108795960B | 公开（公告）日： | 2021-10-19 |
| 发明（设计）人： | 罗红梅;刘琬菁 | 申请（专利权）人： | 中国医学科学院药用植物研究所 |
| 主分类号： | C12N15/60 | 分类号： | C12N15/60;C12N9/88;C12N15/70;C12P5/00 |
| 代理公司： | 北京慕达星云知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 11465 | 代理人： | 崔自京 |
| 地址： | 100193 北京市海*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 应用 丹参 smtps3 基因 合成 多种 倍半萜 化合物 方法 | ||
1.一种丹参萜类合酶编码基因SmTPS3，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。
2.根据权利要求1所述的一种丹参萜类合酶编码基因SmTPS3，其特征在于，所述基因SmTPS3编码蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。
3.一种原核表达体系检测基因产物的方法，其特征在于，将pET28a-SmTPS3蛋白异源表达载体转化到大肠杆菌BL21(DE3)中，经卡纳霉素筛选获得阳性克隆，对阳性克隆扩大培养后，加入0.5mM的IPTG，于25℃摇床中，110r/min，避光诱导蛋白表达20h；诱导完成后，取10mL菌液在萃取温度60℃，震荡频率500rpm，萃取时间约30min条件下，以100μm萃取纤维PDMS的固相微萃取柱作为萃取头进行萃取；利用GC-MS仪器进行产物检测，仪器型号：岛津QP2010ultra，参数：Restek-5MS：30m×0.25mm id，film thickness 0.25μm；
丹参萜类合酶编码基因SmTPS3的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。
4.权利要求1所述的一种丹参萜类合酶编码基因SmTPS3在基因工程中的应用，其特征在于，所述基因SmTPS3在细菌、真菌和高等植物中通过基因工程手段参与萜类化合物的合成。
5.根据权利要求4所述的应用，外源基因导入宿主需要一种用于携带基因SmTPS3的质粒，其特征在于，质粒选自原核表达载体：pET系列、pGEX系列，并含有权利要求1中的核苷酸序列。
6.权利要求1所述的SmTPS3基因在催化姜烯、α-佛手柑油烯、β-倍半水芹烯多种倍半萜类化合物生物合成中的应用。
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