[发明专利]一种优良番茄离体培养及无菌嫁接方法

权利要求书

1.一种优良番茄离体培养及无菌嫁接方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）具有优良品质的番茄品种通过茎段诱导增殖获得瓶内有效无根苗；

（2）将优良番茄砧木品种种子经诱导培养、壮苗得到瓶内砧木；

（3）在显微镜下将有效无根苗嫁接在瓶内砧木上，经过培养后，得到生长稳定的嫁接苗，移栽到田间定植；

步骤（2）具体为：

1）将优良番茄砧木品种的种子置于饱和漂白粉上清液中浸泡10min后，冲洗干净，置于自来水下冲滴10-20min，双蒸水冲荡2-3次，在超净工作台内用体积分数为75%的酒精消毒30s，加入0.1wt%升汞处理5-8min，无菌水冲洗3-4遍，用消毒滤纸吸干种子表面水分后接种于经高温高压灭菌的芽诱导培养基中，培养条件为培养室温度23±2℃，暗培养5d，然后光照强度调整为1000-15001x，光照时间10h/d，培养15-20d，得瓶苗；

2）然后将瓶苗移栽于砧木芽壮苗培养基中，LED蓝光照射，光照强度2000-30001x，光照时间12h/d，培养时间15-20d；

所述的芽诱导培养基的配方为：MS+1.5mg/L 6-BA+0.5mg/L KT+0.3mg/L NAA+25g/L糖+6.5g/L琼脂+1.5g/L活性炭；所述的砧木芽壮苗培养基的配方为：1/2MS+0.5mg/L 6-BA+0.3mg/L ABA+0.1mg/LNAA+25g·L^-1糖+6.5g/L琼脂+1.5g/L活性炭；

步骤（3）所述的嫁接具体为：在无菌条件下，选择茎粗壮的砧木苗，切去顶端和部分根端，留茎长2～3cm，然后在砧木根颈上端1.5～2cm韧皮部开小三角形创口；在显微镜下用嫁接刀尖剥取准备好的接穗——无根苗，嫁接到砧木上，用刀背按压使茎尖与砧木的横切口完全接合；嫁接好的试管苗置于1/2MS+0.5mg/L 6-BA+0.3mg/L ABA+0.1mg/L NAA+ 25 g·L^-1糖的培养基中进行培养，培养温度保持在23±1℃，光照强度1500-20001x，光照时间10h/d。

2.根据权利要求1所述的优良番茄离体培养及无菌嫁接方法，其特征在于：步骤（1）具体培养步骤为：

1）材料选取与消毒：采集优良番茄品种饱满茎段用流水冲洗干净，置饱和漂白粉上清液中浸泡15min，并用软毛刷刷洗，自来水下冲滴30min，双蒸水冲荡2-3次，在超净工作台内用体积分数为75%的酒精消毒30s，然后加入10wt%NaClO溶液中处理8-10min，无菌水冲3-4遍，用消毒滤纸吸干表面水分后进行接种；

2）诱导培养：经步骤1）处理后的茎段，接种于经高温高压灭菌的所述的芽诱导培养基中；培养条件：培养室温度为23±2℃，暗培养5d后，光照强度逐渐调整为500-10001x，光照时间8h/d，培养时间20-25d；

3）增殖培养：将经诱导培养所得到的生长良好的丛生芽切开并剪成长度为1-2cm，接种于增殖培养基进行增殖诱导培养，光照时间10h/d，光照强度1500-20001x，增殖培养时间20-30d，获得有效无根苗高2-3cm，将增殖培养中获得的有效完整植株切下作为接穗备用。

3. 根据权利要求2所述的优良番茄离体培养及无菌嫁接方法，其特征在于：步骤3）所述的增殖培养基的配方为：MS+2.0mg/L 6-BA+0.5mg/LKT+0.lmg/LNAA+0.01mg/LTDZ+25g/L糖+6.5g/L 琼脂+1.5g/L 活性炭。

4.根据权利要求1所述的优良番茄离体培养及无菌嫁接方法，其特征在于：步骤（3）所述的培养具体为：嫁接后，嫁接苗经过15-20d培养后逐渐形成愈伤组织，待嫁接苗长出2～3片叶后，进行炼苗、移栽，将待移栽嫁接苗在自然光下炼苗1周，将嫁接苗从试管中取出，洗净根部的残留培养基，阴干到不滴水为止，移栽至装有高压灭菌的培养土的培养钵中；培养钵置于培养室，温度25℃-30℃，湿度保持75-80%，2周后嫁接苗生长稳定，移栽到田间定植。

5.根据权利要求4所述的优良番茄离体培养及无菌嫁接方法，其特征在于：所述的培养土是由珍珠岩、蛭石和泥炭按质量比1:1:1组成的。