[发明专利]原花青素在miR-9表达调控中的应用

说明书

本发明公开了原花青素在miR‑9表达调控中的应用。基于本发明的应用，在巨噬细胞泡沫化过程中加入原花青素提高巨噬细胞中miR‑9的表达水平。本发明分别利用miR‑9抑制剂和模拟物降低和升高miR‑9的表达量，分别观察到对原花青素抑制巨噬细胞泡沫化作用的阻碍和促进功能，发现并证明了原花青素对巨噬细胞泡沫化缓解作用及后续对动脉粥样硬化的治疗或预防潜力。

技术领域

本发明涉及原花青素的新应用，具体涉及原花青素调控miR-9的表达的应用。

背景技术

心血管疾病已经成为全球头号健康问题。在世界范围内，每年约有1670万人死于心血管疾病，占全球死亡率第一位。截至2014年，我国已有2.9亿人存在心血管健康问题，而且今后10年患病人数仍将快速增长。动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)是心血管疾病发生发展的重要病理基础。巨噬细胞泡沫化，即巨噬细胞吞噬大量脂质(oxygenized lowdensity lipoprotein，ox-LDL，富含胆固醇)形成泡沫细胞是AS至关重要的环节，是AS斑块发病早期的标志性事件之一。

发明内容

原花青素是广泛存在于植物界中如葡萄、葡萄籽、可可豆、苹果、花生、高粱及樱桃等中的多酚类化合物，尤其以葡萄籽中含量最为丰富。发明人研究发现原花青素通过miR-9对巨噬细胞泡沫化的影响：通过油红O染色实验观察及细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)含量和胆固醇酯/总胆固醇(CE/TC)的检测发现原花青素处理后巨噬细胞内脂滴含量减少，TC和CE/TC值显著降低，说明巨噬细胞泡沫化程度显著下降。之后检测miR-9的表达水平发现原花青素可以显著提高miR-9表达水平，同时miR-9的靶基因ACAT1(胆固醇酯酶)表达水平显著降低。

基于上述发现，本发明提供了原花青素在miR-9表达调控中的应用。本发明的原花青素可为葡萄籽原花青素、可可豆原花青素、苹果原花青素、花生原花青素、高粱原花青素、樱桃原花青素常见原花青素。

本发明同时提供一种miR-9表达调控方法，方法包括在巨噬细胞泡沫化过程中加入原花青素提高巨噬细胞中miR-9的表达水平。本领域适用的巨噬细胞均适用于本发明。

本发明还提供了原花青素在基因ACAT1表达调控中的应用。

本发明进一步提供了一种基因ACAT1表达调控方法，方法包括在巨噬细胞泡沫化过程中加入原花青素降低巨噬细胞中ACAT1的表达水平。

发明人分别利用miR-9抑制剂和模拟物降低和升高miR-9的表达量，分别观察到对原花青素抑制巨噬细胞泡沫化作用的阻碍和促进功能，发现并证明了原花青素对巨噬细胞泡沫化缓解作用及后续对动脉粥样硬化的治疗或预防潜力。

附图说明

图1为原花青素处理后巨噬细胞内脂质堆积情况；a.Ox-LDL对照组；b.原花青素处理组；c.油红O半定量结果。

图2为原花青素处理对巨噬细胞胆固醇含量的影响；a.总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)；b.胆固醇酯/总胆固醇比率(CE/TC)。

图3为原花青素处理对miR-9和ACAT1表达水平的影响。

图4为miR-9抑制剂和模拟物对原花青素抑制巨噬细胞脂质含量的影响；a.miR-9抑制剂处理组；b.miR-9抑制剂阴性对照组；c.miR-9模拟物处理组；d.miR-9模拟物阴性对照组；e.油红O半定量结果。

具体实施方式

实施例1：油红O染色和胆固醇含量检测实验

人单核THP-1细胞，经复苏、传代后，接种于含有10％胎牛血清、青霉素和链霉素各1.0×10⁵U/L的RPMI 1640培养液中，于37℃，5％ CO₂培养箱中静置培养，每隔2天更换培养液1次，恢复活力。