[发明专利]一种玻璃化法超低温微藻保种技术

说明书

本发明提供了微藻保种技术邻域内的一种玻璃化法超低温微藻保种技术，其先将藻液和实验材料在无菌操作下在培养皿里，培养数天，然后称取适量微藻悬浮液，倒入离心管，不添加其他试剂，以一定转速离心数次，去除下管清液，上管沉淀即为藻种，藻种备用，向藻种中加入玻璃化液，玻加入前先放在预冷温度下预冷，预冷悬浮后移入冻存管，预冻后放入液氮中，保种；本发明的方法制备方法简单，操作简单，不易污染，保种时间较长。

技术邻域

本发明涉及一种保种技术，特别涉及一种玻璃化法超低温微藻保种技术。

背景技术

微藻的营养丰富，在人们的生活和生产实践中具有很广援的应用，在微藻的培养和应用中，保种技术十分重要，大规模微藻产业仅仅靠培养微藻是不够的，必须将藻种保存起来备用，才能满足需要，但微藻个体小，难分离，容易在保种过程中出现藻种单细胞纯种随环境变化发生变异，丧失自身的生理活性和遗传特性，所以藻种保存就显得尤为重要困，目前藻种保种方法常采用继代保种方法，操作重复且繁琐，不断传代过程藻种易污染，保种时间较短。

发明内容

针对现有技术中的缺陷，本发明的目的在于克服上述现有技术中的不足之处，提供一种玻璃化法超低温微藻保种技术，制备方法简单，操作简单，不易污染，保种时间较长。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：一种玻璃化法超低温微藻保种技术，所述制备方法包括以下步骤：

（A1）藻种培养：藻种和实验材料在无菌操作下培养数天，离心收藻，备用；

（A2）玻璃化液处理：将新鲜藻种适量倒入离心管，向离心管内加入适量玻璃化液，预冷一定时间，预冷悬浮后移入冻存管，然后0℃下预冻一定时间后放入液氮中(-196℃ )中，保种。

本发明首先将藻液和实验材料在无菌操作下在培养皿里，培养数天，然后称取适量微藻悬浮液，倒入离心管，不添加其他试剂，以1000rpm转速离心数次，去除下管清液，上管沉淀即为藻种，藻种备用，向藻种中加入玻璃化液，玻璃化液配方为30％蔗糖+15％乙二醇+不同浓度二甲基亚砜+BBMG培养液，加入前先放在0℃下预冷，预冷悬浮后移入冻存管，于0℃下预冻30min后放入液氮(-196℃ )中，保种；与现有技术相比，本发明的有益效果在于：该方法制备方法简单，操作简单，不易污染，保种时间较长。

作为本发明的进一步改进，所述预冷温度为0—4℃。

作为本发明的进一步改进，所述离心转速为1000rpm～5000rpm。

具体实施方式

实施例1

一种玻璃化法超低温微藻保种技术，为制备微藻保种，其按如下步骤进行：

（A1）藻种培养：先将藻液和实验材料在无菌操作下在培养皿里，培养数天，然后称取适量微藻悬浮液，倒入离心管，不添加其他试剂，以1000rpm转速离心数次，去除下管清液，上管沉淀即为藻种，藻种备用；

（A2）玻璃化液处理：向藻种中加入玻璃化液，玻璃化液配方为30％蔗糖+15％乙二醇+不同浓度二甲基亚砜+BBMG培养液，加入前先放在0℃下预冷，预冷悬浮后移入冻存管，于0℃下预冻30min后放入液氮(-196℃ )中，保种。

实施例2

一种玻璃化法超低温微藻保种技术，为制备微藻保种，其按如下步骤进行：

（A1）藻种培养：先将藻液和实验材料在无菌操作下在培养皿里，培养数天，然后称取适量微藻悬浮液，倒入离心管，不添加其他试剂，以4000rpm转速离心数次，去除下管清液，上管沉淀即为藻种，藻种备用；