[发明专利]组织工程肝脏模型、其构建方法及其应用

权利要求书

1.一种构建组织工程肝脏模型的方法，所述组织工程肝脏模型为组织工程肝脏疾病模型，包括肝脏生物基质支架的获得和对肝脏生物基质支架进行再细胞化；

所述肝脏生物基质支架用以下方法获得：将取自SD大鼠血液流尽的肝脏器官用含PLA2的1% SDC溶液灌注至肝脏透明，洗尽肝脏中残留的SDC，得到去细胞的肝脏即为肝脏生物基质支架；具体为：雄性SD大鼠进行麻醉后，剪开腹腔，分离出肝脏门静脉，用导管插入门静脉作为灌注入口；灌注PBS，将血液从肝脏中移除；灌注含有36 U/L的磷脂酶A的21％去氧胆酸钠溶液去除血浆和核膜，灌注直到肝组织变得透明；用3.4 M NaCl缓冲液灌注30分钟，用PBS冲洗肝脏15分钟，然后用DNase和RNase灌注除去残余的核酸，得到肝脏生物基质支架粗品，简称LBS粗品；用PBS冲洗LBS粗品除去残留的盐和核酸酶，保留肝中叶，所有血管结构完整，最后使用钴-60γ辐照器进行灭菌，得到肝脏生物基质支架；

对肝脏生物基质支架进行再细胞化具体为：将肝脏生物基质支架用无血清的培养基以循环灌注至平衡后，用培养基将肝样种子细胞稀释至浓度为500-100000个细胞/mL，得到肝样种子细胞液，将肝样种子细胞液灌注至肝脏生物基质支架中；用高脂培养基继续灌注进行换液培养，换液培养3-10天，得到组织工程肝脏疾病模型；其中所述肝样种子细胞为人肝细胞癌系HepG2。

2.由权利要求1所述的方法构建获得的组织工程肝脏疾病模型。

3.根据权利要求2所述的组织工程肝脏疾病模型，其中所述疾病选自非酒精性脂肪性肝病、遗传代谢性肝病、病毒性肝炎。

4.权利要求2或3所述的组织工程肝脏疾病模型在构建肝脏相关疾病模型中的应用；或在评价肝脏相关疾病的发病机理中应用；或在评价治疗和/或预防肝脏相关疾病药物有效性中的应用；或在治疗和/或预防肝脏相关疾病药物的药理学、体外机制及毒理学的评价中的应用；所述肝脏相关疾病选自非酒精性脂肪性肝病、遗传代谢性肝病、病毒性肝炎。