[发明专利]一种黄秋葵内参基因及其应用

说明书

本发明属于分子生物学技术领域，提供一种黄秋葵内参基因及其应用，在此基础上设计定量特异引物，18S核糖体RNA基因(18S ribosomal RNA gene,18S r RNA)基因在黄秋葵各生长发育阶段及各组织均能稳定表达，适合在黄秋葵基因表达研究中作为内参基因。本发明首次将18S核糖体RNA基因(18S ribosomal RNA gene,18S r RNA)作为内参基因用于黄秋葵基因表达分析，有利于提高黄秋葵基因表达分析研究的稳定性、可靠性和重复性；本发明提出的检测引物具有特异性，大大的提高了检测效率，提高了检测结果的可信度。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种黄秋葵内参基因及其应用，具体地，利用该黄秋葵内参基因的核苷酸序列为基础设计一对荧光定量特异引物。

背景技术

黄秋葵（Hibiscus esculentus L.），秋葵属，原产于非洲东北部，世界栽培广泛，近年来，国内引进推广较快，栽培面积逐年增长。黄秋葵以食嫩果为主，含丰富蛋白质、维生素及矿物盐、糖聚合体等营养成分，是一种具有较高营养价值、保健功能的健康蔬菜。随着其分子生物学研究的不断深入和发展，基因表达分析正逐渐应用于揭示黄秋葵基因调控机理的研究中。在基因表达分析时，为了消除不同组织细胞间初始模板量、RNA质量、酶促反应效率等的偏差，往往需要引入内参基因对其进行校正。理想的内参基因应该在不同组织类型、生长阶段及不同实验条件下表达水平均保持一致，实际研究中常选择稳定表达的看家基因，如肌动蛋白基因(actin)、甘油醛-3-磷酸-脱氢酶基因(GAPDH)、α微管和β微管蛋白基因((TUA、TUB))、泛素基因(ubiquitin)、18S核糖体RNA(18S rRNA)等作为内参基因。

18S rRNA存在于所有的真核生物细胞中，几乎在所有组织中都高水平表达，在同种细胞或者组织中的蛋白质表达量一般是恒定的，且其作为内参基因在分析植物基因表达以及检测植物体内的病原物研究中应用广泛。但目前关于黄秋葵18S rRNA基因的克隆和作为黄秋葵内参基因的研究还未见报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种黄秋葵内参基因及其应用，并揭露了利用该黄秋葵内参基因为基础设计的实时荧光定量PCR引物。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种黄秋葵内参基因，所述内参基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示；且该内参基因是以黄秋葵DNA为模板、并以如下引物对进行PCR扩增反应所得的；

其中引物对为：

正向引物5'- TTCACCGGACCATTCAATCGGTA -3'，

反向引物5'- TGATCCTTCCGCAGGTTCACCTA -3'。

进一步地，以所述内参基因的核苷酸序列为基础，利用Primer Premier5.0 软件、并遵循实时荧光定量PCR引物设计的原则设计出一对荧光定量特异引物，该对荧光定量特异引物即为所述实时荧光定量PCR引物；

且该实时荧光定量PCR引物为：

正向引物5'- TCCATTGGAGGGCAAGTCT -3'，

反向引物5'- GGCAGTAGGGACGAGCAGA -3'。

所述的黄秋葵内参基因在黄秋葵基因表达分析中的应用。

本发明的有益效果在于：

本发明提供了一种黄秋葵内参基因，同时提供了利用该黄秋葵内参基因为基础设计的实时荧光定量PCR引物，所设计的实时荧光定量PCR引物用于黄秋葵基因表达分析时，能够提高中黄秋葵基因表达分析研究的稳定性、可靠性和重复性；此外，所设计的实时荧光定量PCR引物特异性强，从而能够大大提高采用实时荧光定量检测黄秋葵的检测效率，并提高检测结果的可信度。