[发明专利]一种基于UHPLC-QTrap MS检测斑马鱼脑组织中鞘脂的方法

权利要求书

1.一种基于UHPLC-QTrap MS检测斑马鱼脑组织中5类46种鞘脂的方法，其特征在于，在进行所述UHPLC测定斑马鱼脑组织蛋白的提取液时，以流动相A和流动相B进行梯度洗脱；

所述流动相A为0.3 v/v％~0.5 v/v％的甲酸水溶液；

所述流动相B为体积比为40：（50~70）的0.07 v/v％~0.13 v/v％的甲酸水溶液：异丙醇；

所述梯度洗脱的程序为：

0~3min 时，流动相B 0 v/v %~80 v/v %；

3~8min时，流动相B 80 v/v %~90 v/v %；

8~15min时，流动相B 90 v/v %~95 v/v %；

15.1~17.0 min时，流动相B 0 v/v %；

所述梯度洗脱的流速为0.3~0.5 mL/min；在进行所述UHPLC测定斑马鱼脑组织蛋白的提取液时，色谱柱的固定相为硅胶键合C18官能团；所述色谱柱规格长度为100~200mm，内径为2.1~5.0mm，填料粒径为1.7~5μm；所述色谱柱的柱温为28℃~32℃；

所述QTrap MS的条件为：采集模式为正离子模式下的动态多反应监测模式；离子源电压为5000V，离子源温度为600℃，雾化气为55psi，干燥气为55psi；其中上述条件涉及的各个数值参数的浮动范围为该数值参数±10％；

所述斑马鱼脑组织蛋白的制备方法包括：1）通过蛋白沉淀剂裂解脑组织并沉淀蛋白；2）加入氯仿震荡分层，取氯仿层；重复步骤2）；3）将所述氯仿层用氮气吹干；所述蛋白沉淀剂选自甲醇和/或乙腈；

所述鞘脂选自下列成分中的至少一种：N-乙酰基-D-鞘磷脂、N-己酰基-D-鞘磷脂、N-十二烷酰基-D-鞘磷脂、N-十六烷酰基-D-鞘磷脂、N-十七烷酰基-D-鞘磷脂、N-十八烷酰基-D-鞘磷脂、N-油酰基-D-鞘磷脂、N-十二烷酰基-D-二氢鞘磷脂、N-乙酰基-D-鞘氨醇、N-丁酰基-D-鞘氨醇、N-己酰基-D-鞘氨醇、N-辛酰基-D-鞘氨醇、N-癸酰基-D-鞘氨醇、N-十二烷酰基-D-鞘氨醇、N-十四酰基-D-鞘氨醇、N-十六烷酰基-D-鞘氨醇、N-十七烷酰基-D-鞘氨醇、N-十八烷酰基-D-鞘氨醇、N-油酰基-D-鞘氨醇、N-二十酰基-D-鞘氨醇、N-二十二酰基-D-鞘氨醇、N-二十四酰基-D-鞘氨醇、N-神经酸酰基-D-鞘氨醇、D-葡糖基-N-辛酰基-D-鞘氨醇、D-葡糖基-N-十二烷酰基-D-鞘氨醇、D-葡糖基-N-十六烷酰基-D-鞘氨醇、D-葡糖基-N-十八烷酰基-D-鞘氨醇、D-葡糖基-N-油酰基-D-鞘氨醇、D-葡糖基-N-神经酸酰基-D-鞘氨醇、D-乳糖基-N-辛酰基-D-鞘氨醇、D-乳糖基-N-十二烷酰基-D-鞘氨醇、D-乳糖基-N-十六烷酰基-D-鞘氨醇、D-乳糖基-N-神经酸酰基-D-鞘氨醇、D-乳糖基-N-二十四酰基-D-鞘氨醇、N-十六烷酰基-神经酰胺-1-磷酸盐、N-油酰基-神经酰胺-1-磷酸盐、N-二十四酰基-神经酰胺-1-磷酸盐、N-二十四酰基--鞘氨醇-1-磷酸盐、N-乙酰基-D-二氢鞘氨醇、N-己酰基-D-二氢鞘氨醇、N-辛酰基-D-二氢鞘氨醇、N-十二烷酰基-D-二氢鞘氨醇、N-十六烷酰基-D-二氢鞘氨醇、N-油酰基-D-二氢鞘氨醇、N-二十四酰基-D-二氢鞘氨醇、N-神经酸酰基-D-二氢鞘氨醇。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述色谱柱为Waters X-bridge C18。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，采用所述QTrap MS的信息依赖扫描模式获得鞘脂的二级碎片质谱图。

4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，所述QTrap MS的质谱系统为ABSCIEX Qtrap 6500+超高效液相色谱-四极杆线性离子阱质谱系统。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述斑马鱼脑组织蛋白的制备方法还包括：

用甲醇复溶，过0.20~0.24μm微孔滤膜。