[发明专利]一种用改良Neubauer计数板进行网织红细胞计数的方法在审
申请号: | 201810652441.8 | 申请日: | 2018-06-22 |
公开(公告)号: | CN108827860A | 公开(公告)日: | 2018-11-16 |
发明(设计)人: | 侯振江;陈洋;刘玉枝;李红岩;王凤玲 | 申请(专利权)人: | 沧州医学高等专科学校 |
主分类号: | G01N15/10 | 分类号: | G01N15/10 |
代理公司: | 北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙) 11350 | 代理人: | 汤东凤 |
地址: | 061000*** | 国省代码: | 河北;13 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 网织红细胞 计数板 常规化 改良 制备细胞悬液 操作程序 骨髓移植 鉴别诊断 疗效观察 权威机构 预后监测 血涂片 窥盘 贫血 制备 标准化 诊断 认可 成功 | ||
本发明涉及网织红细胞计数的技术领域,特别是涉及一种用改良Neubauer计数板进行网织红细胞计数的方法,建立了一种用改良Neubauer计数板直接进行网织红细胞计数的常规化操作,其结果与权威机构认可的方法一致,获得了满意的效果;减少用Miller窥盘制备血涂片的麻烦,避免网织红细胞分布不均带来的误差;简化了操作程序,具有简捷价廉、快速实用、准确可靠、常规化、标准化操作等优点,临床广为普及。对贫血的诊断、鉴别诊断、疗效观察、预后监测和骨髓移植成功与否的判断具有重要的意义;包括以下步骤:(1)制备细胞悬液;(2)选择网织红细胞计数板;(3)计数。
技术领域
本发明涉及网织红细胞计数的技术领域,特别是涉及一种用改良Neubauer计数板进行网织红细胞计数的方法。
背景技术
网织红细胞是晚幼红细胞到成熟红细胞之间的过渡型,是未完全成熟的红细胞,由于胞质中残存有核糖体等嗜碱性物质,与煌焦油蓝或新亚甲蓝染料活体染色后,呈蓝色网状物定位于红细胞胞浆内,故称网织红细胞。
网织红细胞通常在显微镜下进行人工计数,此外还有流式细胞仪和血细胞分析仪法,但是它们均需要昂贵的仪器,不适用于基层医院。人工计数法包括玻片法、试管法和Miller窥盘法。血液与染料在玻片或试管内混合,于室温25℃左右,染色8-10min,制成血涂片,计数1000个红细胞分布区域内的Ret数量,计算Ret的百分率,同时进行红细胞计数,可计算Ret的绝对值。我国卫生部临床检验中心强调废除玻片染色法,而采用试管染色法。
国际血液学标准化委员会接受国际临床实验室标准委员会对Ret所下的定义,即任何没有核的含有两个或两个以上的相当于核糖粒RNA蓝染物质颗粒的红细胞为Ret。卫生部临床检验中心和国际血液标准化委员会推荐用Miller窥盘法进行网织红细胞计数。
但是Miller窥盘法由于其价格较高,并且操作较为复杂,在国内多数实验室中基本不被采用。
发明内容
为解决上述技术问题,本发明提供一种可以简化操作过程,并且价格低廉的用改良Neubauer计数板进行网织红细胞计数的方法。
本发明的一种用改良Neubauer计数板进行网织红细胞计数的方法,包括以下步骤:
(1)制备细胞悬液:取小试管1支,加血液100μl,加1%煌焦油蓝生理盐水染色液100μl,混匀后37℃恒温水浴箱静置10min,摇匀;也可用生理盐水进行100倍稀释,直接进行网织红细胞计数;
(2)选择网织红细胞计数板:将改良Neubauer计数板和盖玻片擦干净,并将盖玻片盖在改良Neubauer计数板上,用微量吸管吸取已经混匀后的细胞悬液冲入改良Neubauer计数板中,静置2-3min,使血细胞下沉;
(3)计数:将改良Neubauer计数板放入高倍显微镜下观察,并用高倍镜计数9个大方格内的网织红细胞数,同时计数中间1个大方格内的红细胞数。
本发明的一种用改良Neubauer计数板进行网织红细胞计数的方法,所述步骤(1)中,1%煌焦油蓝生理盐水染色液的制备方法包括以下步骤:
a、取煌焦油蓝1g、枸橼酸三钠0.4g和氯化钠0.85g放入配置瓶内;
b、向其中加入双重蒸馏水至100ml;
c、完全溶解后对其进行过滤,过滤后备用。
本发明的一种用改良Neubauer计数板进行网织红细胞计数的方法,所述步骤(2)中的盖玻片为改良Neubauer计数板专用盖玻片,其厚度为0.4-0.7mm。
本发明的一种用改良Neubauer计数板进行网织红细胞计数的方法,所述步骤(2)中的盖玻片大小为24mm×20mm×0.6mm。
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