[发明专利]自身癌抗原特异性CD8+ T细胞的分离及增殖方法

权利要求书

1.一种自身癌抗原特异性CD8⁺T细胞的分离方法，其特征在于，包括：

步骤a)，筛选存在于癌症患者血液内的自身癌抗原CD8⁺T细胞表位；

步骤b)，与上述表位的肽及白细胞介素-2一同在培养基中培养从癌症患者的血液中分离的外周血单个核细胞；

步骤c)，在培养的上述外周血单个核细胞中添加与步骤b)相同的肽来诱导4-1BB表达；以及

步骤d)，在涂敷有抗-4-1BB抗体的培养板中培养诱导了4-1BB表达的细胞之后，去除未附着的细胞。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，上述步骤a)的自身癌抗原选自由人端粒酶逆转录酶(基因库：BAC11010.1)、WT1(基因库：AAO61088.1)、NY-ESO1(基因库：CAA05908.1)及黑素瘤抗原-A3(NCBI参考序列：NP_005353.1)组成的组中。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在上述步骤b)中，表位为包含选自由序列1至序列15组成的组中的氨基酸序列的肽。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，上述步骤b)中，培养基为包含自体血浆的培养基。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，上述步骤b)中，培养12至16天。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，上述步骤c)中，表达诱导培养12至36小时。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，上述步骤d)中，培养1至20分钟。

8.一种自身癌抗原特异性CD8⁺T细胞的大量培养方法，其特征在于，包括如下步骤：利用包含白细胞介素-2、抗-CD3抗体及自体血浆的培养基，来使通过权利要求1所述的方法分离的自身癌抗原特异性CD8⁺T细胞和放射线照射的同种异体外周血单个核细胞悬浮之后，注入于培养用袋，追加注入上述培养基来进行培养。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，上述外周血单个核细胞从正常供体分离。

10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，上述培养执行4至15天。