[发明专利]一种快速激活淋巴因子激活杀伤细胞LAK的方法

权利要求书

1.一种快速激活淋巴因子激活杀伤细胞LAK的方法，在培养基中添加rIL-2，其特征在于：在培养基中还添加激活剂酶解多肽C。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，具体步骤为：

将脐血单个核细胞用含10％胎牛血清的RPMI 1640培养基(10％FCS-RPMI 1640)调制至2×10⁶/mL，根据细胞总数接种于不同容量的培养容器中，同时加入终浓度为40-60μg/mL的酶解多肽C以及500IU/mL的rIL-2，置于37℃、5％CO₂条件下培养24h；

酶解多肽C的制备方法为：

将脱脂的小麦胚芽粉经木瓜蛋白酶+中性蛋白酶酶解，酶解结束后灭酶处理得到小麦胚芽的酶解液，冷却后，离心，上清冷冻干燥得冻干粉。

将冻干粉用超纯水溶解，依次用截留分子量为10000u、7000u、5000u、3000u的超滤膜对所得到的酶解液冻干粉进行分离，将超滤所得5000u～3000u组分冷冻干燥得到酶解多肽C。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，酶解条件为：经木瓜蛋白酶(酶活力为80万U/g)+中性蛋白酶(酶活力为20万U/g)在复合配比3:1、pH为6.0、温度55℃、底物质量浓度40g/L、加酶量5％(100g底物加5g酶)、酶解时间8h的条件下酶解。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：酶解结束后升温至90℃保持20min进行灭酶处理得到小麦胚芽的酶解液。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，离心条件为：9000rpm离心25min。

6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：采用聚蔗糖泛影葡胺分层液密度梯度离心法从脐血中分离脐血单个核细胞。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，脐血采集方法为：采用密闭式收集法采集足月顺产健康新生儿脐血，而且产前检查其父母均无遗传性疾病家族史，采用柠檬酸-磷酸-葡萄糖抗凝的密闭式血袋在胎盘娩出前从脐带断端远离新生儿侧采集；采集后4℃冰箱保存，24h内进行分离和冻存处理备用。

8.一种快速激活淋巴因子激活杀伤细胞LAK的培养基，其特征在于：在含10％胎牛血清的RPMI 1640培养基中添加终浓度为40-60μg/mL的酶解多肽C以及500IU/mL的rIL-2。

9.权利要求8所述的培养基在淋巴因子激活杀伤细胞LAK的快速激活方面的应用。