[发明专利]一种与辣椒细胞质雄性不育恢复基因紧密连锁的分子标记及其获得方法和应用

权利要求书

1.一种与辣椒细胞质雄性不育恢复基因紧密连锁的分子标记CaML的应用，其特征在于：用于辣椒育性恢复性的鉴定，所述的鉴定方法具体包括如下步骤：

（1）提取辣椒单株的DNA并作为模板；

（2）采用分子标记CaML进行PCR扩增，所述的分子标记为正向引物CaML-F和反向引物CaML-R，其正向引物序列为SEQ ID NO.1，反向引物序列为SEQ ID NO.2；

（3）对步骤（2）所得PCR扩增产物进行限制性内切酶BcuI酶切；

（4）利用1%琼脂糖凝胶对步骤（3）所得酶切产物进行凝胶电泳，出现不同带型；

（5）检测步骤（4）所得带型，如果出现的是单带时，可判定辣椒植株为不含恢复基因的不育植株；如果出现双带时，可判定辣椒植株为含有纯合恢复基因的可育株；如果出现三带时，可判定辣椒植株为含有恢复基因的杂合可育株。

2.根据权利要求1所述的与辣椒细胞质雄性不育恢复基因紧密连锁的分子标记CaML的应用，其特征在于：步骤（2）中所述的PCR扩增反应体系，按总体积为15 μl计，包括如下各组分：

ddH₂O 10.4 μl，10×PCR Buffer 1.5 μl，1.2 μl dNTPs，0.08 μl Taq DNA聚合酶，0.4μl正向引物，0.4 μl反向引物以及1.0 μl DNA模板。

3.根据权利要求1所述的与辣椒细胞质雄性不育恢复基因紧密连锁的分子标记CaML的应用，其特征在于：步骤（2）中所述的PCR扩增反应条件为：95.0 ℃预变性3 min；95.0 ℃变性30 s，55.0 ℃复性30 s，72.0 ℃延伸40 s，35个循环；72.0 ℃延伸5 min，4℃保存。

4.根据权利要求1所述的与辣椒细胞质雄性不育恢复基因紧密连锁的分子标记CaML的应用，其特征在于：步骤（3）中所述的酶切体系如下：

按总体积为30 μl计，包括如下各组分：

17 μl ddH₂O，10 μl PCR产物，2 μl Buffer Tango，1 μl 10 U/μl BcuI。

5.根据权利要求1所述的与辣椒细胞质雄性不育恢复基因紧密连锁的分子标记CaML的应用，其特征在于：步骤（3）中所述的酶切反应条件为37 ℃，反应4 h。