[发明专利]结直肠癌长链非编码RNA-HOTAIR分子标志物及其应用

说明书

本发明公开了一种用于辅助诊断结直肠癌（CRC）的长链非编码RNA标志物，所述的长链非编码RNA为HOTAIR，检测其表达量可应用于结直肠癌辅助诊断或预测病情的发展，监测p21的表达情况可预测结直肠癌的分化、浸润深度、增生和转移情况，具有判断预后的价值。可通过RT‑qPCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交、芯片或高通量测序平台检测LncRNA HOTAIR基因的表达水平，同时还公开了沉默HOTAIR能显著抑制CRC细胞的增殖、迁移能力、侵袭能力，降低PCNA、Ki67、cyclin E、CDK2的表达，并且可介导p21的表达增加。本发明提供了一种结直肠癌的分子标记物，为结直肠癌的机制研究以及临床个体化治疗提供理论基础，通过对LncRNA HOTAIR在CRC中表达的监测可以为临床治疗CRC提出了一种新的治疗策略。

技术领域

本发明涉及生物医学领域，具体为用于辅助诊断结直肠癌及预测结直肠癌通过靶向介导p21表达上调的长链非编码RNA标志物。

背景技术

结直肠癌（colorectal cancer，CRC）是常见的消化道恶性肿瘤，世界范围年致死率居恶性肿瘤约占10%。虽然中国的结直肠癌发生率低于西方国家，但其发生率仍急速上升。其发病率和死亡率已居我国全部恶性肿瘤的第 ３ 位，仅次于肺癌和胃癌，病死率位居第 ５位，已严重影响人们的健康和生活质量。结直肠癌早期没有明显的临床症状，并且缺乏特异性强、敏感性高的检测方法，大多数结直肠癌患者在确诊时往往是晚期，因此，探索结直肠癌发生发展的内在机制，对结直肠癌的预防、治疗，提高晚期患者生活质量具有重要的意义。

目前结直肠癌常用的初筛方法是肠道分泌物的检测粪便潜血试验（FOBT），而内镜诊断结肠镜被认为是结直肠癌检查的金标准。可应用于结直肠癌诊断的影像学检查以钡剂灌肠（BE）为基本检查方法，而超声、计算机断层扫描 ( CT )和核磁共振成像( MRI )在肿瘤的分期中发挥重要作用。正电子发射体层摄影（PET）对评价结直肠癌复发具有较高的准确性。CT结肠成像（CTC）是一项利用空气充满结直肠再结合CT断层扫描技术重构结直肠形状的微创性检查方法。外周血肿瘤标志物是作为结直肠癌早期诊断的一种无创性检测方法，其中癌胚抗原（CEA）是目前唯一被普遍认可的CRC诊断指标。这些方法各具优点，但同时也各显示有某方面的不足。由于技术水平所造成的诊断不明确，很可能会导致部分早期结直肠癌患者失去最佳的治疗机会。

针对结直肠癌的诊断方法，尤其是对术后患者的预后风险分层、早期癌精确诊断以及癌前病变癌变风险预警，需要更准确的指标进行补充。运用分子生物学方法研究鉴定有效的分子标志物，是辅助现有临床诊断、指导临床干预和癌前预警的关键手段。

长链非编码RNAs (Long non-coding RNAs, LncRNAs)，是一类片段超过200个核苷酸而无编码蛋白质功能的RNA分子。LncRNA通过各种分子机制能起到不同的生物学作用，包括具有反式基因调节作用的 hox 转录反义 RNA（HOTAIR）、遗传印记（如 H19的过表达在乳腺癌细胞增殖中起重要作用）和 Ｘ 染色体特异性失活转录物作用在 Ｘ 染色体使其失活等。 LncRNA 在表观遗传调控、转录调控以及转录后调控等多种层面上调控基因的表达水平，参与多种生物功能。随着高通量测序技术的普及以及对LncRNAs的了解，越来越多的证据证实，LncRNAs参与了癌症的发生，发展。HOTAIR是一种在许多肿瘤（包括结直肠癌）的发病机制中起着重要作用的长链非编码RNA。目前研究发现在肝癌、乳腺癌、胃癌、结直肠癌、肺癌等癌症中均检测到HOTAIR高表达，HOTAIR高表达会抑制抑癌基因的表达，促进肿瘤细胞增殖、浸润和转移。

p21基因是细胞周期蛋白依靠性激酶抑制剂家族中的一员，它是位于p53基因下游的细胞周期素依赖性激酶抑制因子。p21可以和p53共同构成细胞周期G1检查站，因DNA损伤后不经过修复则无法通过，减少了受损DNA的复制和积累，从而发挥抑癌作用。研究表明：p21与肿瘤的分化、浸润深度、增生和转移有关，具有判断预后的价值。

发明内容