[发明专利]一种β-酪蛋白基因分型的HRM检测方法及引物在审
| 申请号： | 201810660317.6 | 申请日： | 2018-06-25 |
| 公开（公告）号： | CN108823321A | 公开（公告）日： | 2018-11-16 |
| 发明（设计）人： | 耿晓晖;殷臣胤 | 申请（专利权）人： | 北京向中生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888;C12Q1/6858;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京市安伦律师事务所 11339 | 代理人： | 郭扬;韩景漫 |
| 地址： | 100084 北京市海淀*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | β -酪蛋白基因 检测 引物 样本DNA 基因型 分型 高通量检测 酪蛋白基因 扩增产物 上游引物 收集数据 下游引物 引物序列 酪蛋白 分析 | ||
1.一种用于β-酪蛋白基因分型的HRM检测的引物，其特征在于，所述引物序列如下：
上游引物：5’-ATC CAC CCC TTT GCC CAG AC-3’，
下游引物：5’-GGG GTT TGA GTA AGA GGA GGG-3’。
2.一种β-酪蛋白基因分型的HRM检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
（A）提取样本DNA；
（B）对所述样本DNA采用如权利要求1所述的引物进行PCR扩增；
（C）对PCR扩增产物进行HRM检测，收集数据，确定扩增产物基因型。
3.根据权利要求2所述的β-酪蛋白基因分型的HRM检测方法，其特征在于，所述步骤（B）中PCR扩增反应按以下步骤进行：
（1）95℃2分钟；
（2）95℃10秒，60℃30秒，共进行40个循环。
4.根据权利要求2所述的β-酪蛋白基因分型的HRM检测方法，其特征在于，所述步骤（B）中PCR扩增是在反应液中进行的，其中20μl的反应液由以下组分组成：
2X HRM Analysis Premix：10μl；
10μM的上游引物：0.6μl；
10μM的下游引物：0.6μl；
50ng/μl的DNA模板：1μl；
RNase-Free ddH2O：补齐至20μl，
其中，所述2X HRM Analysis Premix包括500μM dNTP、0.1U DNA聚合酶、饱和荧光染料、20mM Tris-HCl、100mM KCl及3mM MgCl2。
5.根据权利要求4所述的β-酪蛋白基因分型的HRM检测方法，其特征在于：所述饱和荧光染料为Eva Green染料。
6.根据权利要求2所述的β-酪蛋白基因分型的HRM检测方法，其特征在于，所述步骤（C）中对PCR扩增产物进行HRM分析的产物熔解过程为：95℃保持10秒，降到40℃保持10秒，之后从40℃升温熔解至85℃，熔解速率为0.05℃/秒，升温至85℃后保持1秒，之后降至40℃保持30秒；在从40℃升温熔解至85℃的过程中实时检测信号，信号检测频率为12次/℃。
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