[发明专利]调节CHO-K1表达系统所分泌抗体的酸性峰含量的方法有效
| 申请号： | 201810661328.6 | 申请日： | 2018-06-25 |
| 公开（公告）号： | CN108823267B | 公开（公告）日： | 2020-05-08 |
| 发明（设计）人： | 肖尚;翁源灿 | 申请（专利权）人： | 深圳市菲鹏生物制药股份有限公司 |
| 主分类号： | C12P21/00 | 分类号： | C12P21/00;C12N5/10;C12R1/91 |
| 代理公司： | 广州华进联合专利商标代理有限公司 44224 | 代理人： | 潘霞 |
| 地址： | 518000 广东省深圳市前海深港合作区前*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 调节 cho k1 表达 系统 分泌 抗体 酸性 含量 方法 | ||
1.一种降低CHO-K1表达系统所分泌抗体的酸性峰含量的方法，其特征在于，包括如下步骤：
将CHO-K1细胞接种到培养基中进行细胞培养，及
在所述细胞培养过程中添加酪氨酸和补料培养基，继续培养以使所述CHO-K1细胞分泌具有合适酸性峰含量的目的抗体，所述酪氨酸的添加量为0.15mmol/(L·天)～1.2mmol/(L·天)。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，其中所述培养基为：CD optiCHOTM AGTTM培养基、CellventoTM CD-220培养基、Dynamis培养基和Advance培养基中的一种或多种的混合。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述补料培养基为：Effendent FeedTM A+、Effendent FeedTM B+或Cell boost 7a补料培养基中的一种或多种的混合。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述补料培养基的加入方式为每天一次～每三天一次，每次加入的所述补料培养基占所述培养基总体积的1％～5％。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述酪氨酸的添加量为0.6mmol/(L·天)。
6.根据权利要求1～5任一项所述的方法，其特征在于，在所述细胞培养过程中，维持细胞培养液中的糖浓度为2g/L～6g/L。
7.根据权利要求1～5任一项所述的方法，其特征在于，所述CHO-K1细胞为携带GS基因且在所述GS基因的下游插入了外源性基因表达载体的细胞。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述外源性基因表达载体选自纳武单抗表达载体、贝伐珠单抗表达载体和阿达木单抗表达载体中的至少一种。
9.一种降低CHO-K1表达系统所分泌抗体的酸性峰含量的方法，其特征在于，包括如下步骤：
将CHO-K1细胞接种到培养基中进行细胞培养，所述培养基中含有Dynamis培养基和Advance培养基，所述Dynamis培养基与所述Advance培养基的体积比为1～2:1～2；及
在所述培养基中培养1天～3天后，在所述培养基中添加酪氨酸和Cellboost7a补料培养基，并维持细胞培养液中的糖浓度为2g/L～6g/L，继续培养10天～15天以使所述CHO-K1细胞分泌的目的抗体的酸性峰含量降低，其中，所述酪氨酸的添加量为0.15mmol/(L·天)～1.2mmol/(L·天)，所述Cell boost 7a补料培养基的加入方式为每天一次～每三天一次，每次加入的所述Cell boost 7a补料培养基占所述培养基总体积的1％～5％。
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