[发明专利]一种纯化利拉鲁肽的方法

权利要求书

1.一种纯化利拉鲁肽的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一，利拉鲁肽粗品预处理得到利拉鲁肽粗肽水溶液；

步骤二，去除片段杂质的第一次HPLC纯化；

所述片段杂质包括：H-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-OH，H- Ala-Ala-Lys(Pal-γ-Glu)-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Arg-Gly-OH；

所述第一次HPLC纯化的具体步骤包括：以八烷基硅烷键合硅胶填料为固定相，以磷酸为流动相A，以乙腈为流动相B，检测波长为230nm，进行HPLC线性梯度洗脱，收取含有利拉鲁肽样品的馏分；

所述流动相A采用0.5%磷酸溶液，磷酸溶液由1000ml水，加5ml磷酸，混合均匀，用三乙胺调节pH值至7.0得到；

步骤三，除去溶剂，得到利拉鲁肽第一步样品溶液；

步骤四，去除合成产生的多Gly的序列、缺Gly的序列及差向异构体的第二次HPLC纯化；第二次HPLC纯化去除的杂质包括：D-His¹、D-Ser⁸、D-Ala¹⁹、D-Glu²¹、D-Arg³⁰、Endo-Gly³¹、Endo-Gly²⁹、Des-Gly¹⁶；

所述第二次HPLC纯化的具体步骤为：以HILIC色谱柱填料为固定相，以三氟乙酸溶液与乙腈的混合液为流动相A，以乙腈为流动相B，检测波长为230nm，进行HPLC梯度洗脱，收取含有利拉鲁肽样品的馏分；

流动相A为0.08％三氟乙酸溶液：乙腈=70V:30V的混合液，0.08％三氟乙酸溶液由1000ml水加三氟乙酸0.8ml混合成；

步骤五，除去溶剂得到利拉鲁肽第二步样品溶液，调节PH值到6.5，得到利拉鲁肽最终样品溶液。

2.根据权利要求1所述的一种纯化利拉鲁肽的方法，其特征在于，步骤一，利拉鲁肽粗品预处理得到利拉鲁肽粗肽水溶液；所述预处理的步骤包括：

将利拉鲁肽粗品溶于乙腈水溶液中得到利拉鲁肽粗肽水溶液；

取利拉鲁肽水溶液用滤膜过滤除去不溶性颗粒，收集滤液备用。

3.根据权利要求1所述的一种纯化利拉鲁肽的方法，其特征在于，步骤三，用旋转蒸发器水浴温度在30~35℃，真空度在-0.09MPa以下除去部分乙腈，得到利拉鲁肽第一步样品溶液，样品溶液为碱性。

4.根据权利要求1所述的一种纯化利拉鲁肽的方法，其特征在于，步骤五，用旋转蒸发器水浴温度在30~35℃，真空度在-0.09MPa以下除去部分乙腈，得到利拉鲁肽第二步样品溶液，利拉鲁肽第二步样品溶液含三氟乙酸，溶液为酸性，用氨水调PH到6.5。