[发明专利]一种亚胺类吖啶衍生物荧光探针及其制备方法和检测MORAb-3-1抗体应用

说明书

本发明公开一种亚胺类吖啶衍生物荧光探针及其制备方法和检测MORAb‑3‑1抗体应用，利用抗原抗体特异性结合，建立一种MORAb‑3‑1抗体检测方法。本发明的MORAb‑3‑1抗体检测技术效果如下：1.首次提出了亚胺类吖啶衍生物探针与人血清白蛋白（HSA）结合，再与MORAb‑3‑1抗体结合，并在荧光倒置显微镜下观察MORAb‑3‑1抗体；2.利用光物理及光化学性质对探针与抗原结合作出判断；3.本发明有灵敏度高、简便快速、准确的特点，与传统的染料法比较为优越；。

技术领域

本发明涉及发光材料检测领域，具体涉及一种亚胺类吖啶衍生物荧光探针制备方法及利用该生物技术探针检测MORAb-3-1抗体的方法。

背景技术

荧光探针是指具有荧光性质的化合物，其通过与待测物质相互络合反应，实现识别目标物质的目的，通过相应的荧光信号传导机制将这种识别信号转换成荧光发射波长的蓝移或红移的信号和荧光强度的变化，从而实现分子水平上的实时原位检测。吖啶及其衍生物是一类由蒽中间环上的一个碳原子被氮原子取代而形成的含氮的三元环化合物，又称氮蒽。吖啶最早是由Carl Gräbe和Heinrich Caro在1871年从煤焦油中提取并获得发展。吖啶类化合物拥有特殊的结构和活性，在过去的20～30年间，于抗菌，抗肿瘤，抗疟疾和抗肿瘤剂等药物合成中有广泛运用。

蛋白质是组成人体一切细胞的基本有机物，是人体内不可缺少的主要物质之一。其中，人血清白蛋白（HSA）是血浆里最丰富的蛋白质，可以存储、转运各种小分子化合物，可以结合许多外源和内源性化合物。通过观察荧光化合物与蛋白质结合后，蛋白质结构产生的相关变化和其内源性荧光强度的变化情况，可以获很多有效实用的信息。对于阐明药物的药理作用、药代动力学特征及指导合理用药和新药的开发等方面也有非常重要的意义。蛋白质结构可以分为四个不同的结构。HSA属于简单蛋白，不同的物质在HSA上的结合位点有所不同，各个结合位点都有一定的特异性。

Mesothelin（间皮素）是一种特异性标志物，位于各种恶性肿瘤的表面，其分子量大约为 40 KDa，是分布于间皮细胞上的一种糖蛋白。在恶性肿瘤细胞中Mesothelin呈现高表达状态，但在正常的细胞组织中表达较低。相关报道指出恶性肿瘤细胞的存活、转移及抗药性等方面，Mesothelin可能起着重要的作用。MORAb-3-1抗体是靶向Mesothelin的抗体，是人鼠嵌合型抗体。本课题使用亚胺类吖啶化合物作为荧光探针与人血清白蛋白结合，再与MORAb-3-1抗体结合，从而识别MORAb-3-1抗体，当抗体与Mesothelin特异性结合后，可以用荧光成像观察到细胞。

发明内容

本发明的目的之一是提供一种用于检测MORAb-3-1抗体的小分子荧光探针和应用。吖啶类的荧光反应体系较之其他的荧光化合物简单，不需要加入催化剂，在酸或者碱的体系中，就能发出强烈荧光，并且具有发光效率高，背景干扰小等特点，是一类具有广阔前途的荧光探针。

本发明的另一目的是提供一类用于识别MORAb-3-1抗体的小分子荧光探针的合成方法， 该方法具有操作方便、原料廉价、提纯简单等优点。

本发明所采用的技术方案为：一种用于识别MORAb-3-1抗体的荧光探针，其特征在于：该荧光探针的结构如下:

本发明上述的用于识别MORAb-3-1抗体的荧光探针的合成方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)中间体化合物1的合成：