[发明专利]一种海藻糖合成酶基因优化序列及其应用有效
| 申请号： | 201810666253.0 | 申请日： | 2018-06-22 |
| 公开（公告）号： | CN108728457B | 公开（公告）日： | 2021-09-17 |
| 发明（设计）人： | 张晓元;刘飞;郝荣华;袁丹丹;陈勉;凌沛学;张辉;解荣利;王羽;高亮 | 申请（专利权）人： | 山东省药学科学院 |
| 主分类号： | C12N15/54 | 分类号： | C12N15/54;C12N9/10;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 济南泉城专利商标事务所 37218 | 代理人： | 李桂存 |
| 地址： | 250101 山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 海藻 合成 基因 优化 序列 及其 应用 | ||
1.一种经序列优化的海藻糖合成酶基因，其特征在于，核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。
2.一种含有如权利要求1所述的海藻糖合成酶基因的重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体的质粒选自pET-20b(+)、pET-22b(+)、pET-25b(+)、pET-26b(+)或pET-27b(+)。
3.根据权利要求2所述的重组表达载体，其特征在于，重组表达载体含有信号肽的编码基因。
4.根据权利要求3所述的重组表达载体，其特征在于，所述信号肽为pelB信号肽。
5.一种含有如权利要求1所述的海藻糖合成酶基因或如权利要求2所述的重组表达载体的大肠杆菌基因工程菌株。
6.根据权利要求5所述的大肠杆菌基因工程菌株，其特征在于，所述大肠杆菌基因工程菌株的宿主菌选自BL21(DE3)、BLR(DE3)、BL21-Gold(DE3)、Tuner(DE3)、HMS174(DE3)、C43(DE3)、NovaBlue(DE3)或Rosetta gammi (DE3)菌株。
7.一种如权利要求1所述的海藻糖合成酶基因、如权利要求2所述的重组表达载体或如权利要求5所述的大肠杆菌基因工程菌株在生产灰色链霉菌来源海藻糖合成酶中的应用。
8.一种采用如权利要求1所述的海藻糖合成酶基因、如权利要求2所述的重组表达载体或如权利要求5所述的大肠杆菌基因工程菌株生产灰色链霉菌来源海藻糖合成酶的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）以IPTG为诱导剂，诱导培养含有海藻糖合成酶基因优化序列的重组表达载体的大肠杆菌基因工程菌株；
（2）收集诱导培养后的菌体，然后裂解菌体、分离纯化获得灰色链霉菌来源海藻糖合成酶。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，步骤（1）中，所述IPTG的终浓度为0.2-1mM；诱导时间为4-20h；诱导时的菌悬液OD600为0.8-1.0。
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