[发明专利]一种检测抗烟草花叶病毒Np基因的分子标记及其应用

说明书

本发明提供了一种检测抗烟草花叶病毒Np基因的分子标记及其应用。所述分子标记的序列如SEQ No.1所示。使用特异性引物对待测植株进行PCR扩增，根据扩增产物是否含有所述分子标记来判断植株是否含有Np基因。该分子标记的特异性引物对的序列如SEQ No.2和SEQ No.3所示。本发明所述的分子标记可用于筛选新的抗烟草花叶病毒种质资源。

技术领域

本发明属于植物分子遗传学和烟草种质创新技术领域，进一步属于烟草抗病育种技术领域，具体涉及一种检测抗烟草花叶病毒Np基因的分子标记及其应用。

背景技术

普通烟草花叶病是烟叶生产中分布广、为害重的主要病害之一，其病原烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus， TMV）广泛存在于寄主活体及其残体上，即使在低温和高温条件仍旧能保持一定的活性，而且其寄主范围非常广，能侵染茄科（烟草、番茄、茄子）、葫芦科（西瓜）、十字花科（油麦菜）等科植物。

选育抗TMV的品种，是应对花叶病最为经济和有效的手段，前人已将野生烟草心叶烟（Nicotiana glutinosa）中对TMV免疫的N基因转育到栽培烟草中。尽管N基因是显性单基因控制，是人类首次克隆的植物抗病基因，但由于连锁累赘的存在，迄今仍没有适宜的高抗TMV烤烟品种进行大规模推广种植。因此，现阶段除了利用烟草基因组序列数据、设计引物、从大批量含N基因的杂交后代筛选短的抗TMV片段外，还在抗TMV的其它野生烟草资源中寻求新的TMV抗源，并转育栽培烟草 。已有的研究表明在野生烟草种质资源中，除N. glutinosa外，还有N. arentsii，N. wigandioides，N. undulata，N. stocktonii，N. repanda，N. cordiforlia，N. knightiana，N. paniculata等高抗TMV，这些抗TMV的野生烟基因组具有与N. glutinosa抗TMV的N基因同源的基因。通过比较分析发现：圆锥烟草（Nicotiana paniculata PI555550）含有与N基因同源的Np基因，Np基因独有一个完整的2.06 kb长的反转录转座子。

因此，本发明利用该反转录转座子筛选抗病相关分子标记，为筛选新的抗病种质资源和烤烟品种的抗病改良提供新材料与数据支撑。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种抗烟草花叶病毒Np基因的分子标记，所述分子标记的序列如SEQ ID No.1所示。

本发明的第二目的在于提供一种检测抗烟草花叶病毒Np基因的方法，即使用特异性引物对待测植株进行PCR扩增，根据扩增产物是否含有所述分子标记来判断植株是否含有Np基因。

本发明的第三目的在于提供一种检测所述分子标记的特异性引物对，所述特异性引物对的正向引物序列如SEQ No.2所示，反向引物序列如SEQ No.3所示。

本发明的第四目的在于提供一种所述分子标记的应用，即利用所述分子标记筛选新的抗烟草花叶病毒植物种质资源，利用新的种质资源培育新的抗病品种。