[发明专利]一种靶向结合淋巴癌细胞系的特异性多肽及其应用

说明书

本发明涉及一种靶向结合淋巴癌细胞系的特异性多肽及其应用，属于生物医药领域；发明基于体外噬菌体展示技术，体外淘选并获得能靶向结合淋巴癌细胞系的特异性多肽TUZG12；经过体外细胞摄取及分布实验证明所述多肽对淋巴癌细胞系具有靶向结合活性；本发明还通过体外细胞活性实验结果表明，促凋亡肽DKK偶联TUZG12多肽后能在一定程度上提高DKK对淋巴癌细胞的增殖活性抑制效果；本发明筛选所得多肽对多个淋巴癌细胞系具有良好的靶向结合活性，并能提高细胞毒性多肽对靶标肿瘤细胞的杀伤作用，对临床上淋巴瘤的诊断和治疗具有重要的应用价值。

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种靶向结合淋巴癌细胞系的特异性多肽及其应用。

背景技术

与传统的抗体类靶向分子相比，特异性结合肿瘤的小分子多肽，由于其免疫原性较低，生产成本更低廉，可获得表面密度更高(每单位表面的肽数量较多，因此这种缀合物的亲和力较高)以及组织渗透效果更佳，可作为肿瘤诊断的标记物，又可将其与传统化疗药物偶联实现肿瘤的靶向治疗。在FDA批准的多肽药物中，已有一部分多肽药物被指定用于癌症治疗。亮丙瑞林是一种促性腺激素释放激素类似物，已被批准用于治疗前列腺癌，蛋白体抑制剂硼替佐米用于临床上治疗多发性骨髓瘤。在III期临床试验中的环状RGD肽Cilengitide(EMD121974)已经显示有希望治疗胶质母细胞瘤。Exherin(ADH-1)是一种N-钙粘蛋白的环状五肽(Ac-CHAVC)拮抗剂，在I期临床试验中耐受良好。应该指出的是，多肽药物非常适用于癌症适应症，多肽对细胞表面受体具有高亲和力，其在关键的细胞信号传导途径中起作用。此外，多肽的生产成本低于单克隆抗体药物，多肽药物的优势使得多肽疗法的市场发展迅速。

采用噬菌体展示技术，能够生物淘选出与癌细胞特异性结合的多肽。噬菌体展示通过将随机编码外源多肽链的基因与噬菌体外壳蛋白基因融合表达，从而使多肽以融合蛋白形式呈现在噬菌体表面，并能够保持相对独立的空间结构和生物学活性，从而形成数量庞大的随机多肽文库。

在淘选过程中，噬菌体肽库与特定靶标孵育，通过洗涤除去未结合的噬菌体，再通过酸或靶蛋白的配体洗脱与靶点结合的噬菌体，选择适当的宿主细胞繁殖扩增。经3-5轮淘选后，可获得与靶蛋白高亲和力结合的噬菌体克隆。多肽的一级结构可通过DNA序列推算获得。利用噬菌体展示技术筛选肿瘤靶向肽，具有良好的应用价值。自1985年G.P.Smith最早提出该技术以来，噬菌体展示技术已在体外靶分子淘选、全细胞淘选和体内淘选中得到广泛的应用，相关研究论文数量已达数千篇。

噬菌体展示是筛选与特定靶点结合的多肽分子的一项强有力技术，并且通常用于鉴定纯化蛋白的多肽配体。然而，人工培养的全细胞也可以用作分离细胞结合肽的靶标。相比靶蛋白体外淘选，直接采用全细胞淘选具有一定的优势：第一，不需要事先对受体结构的了解和分析，受体结构处于天然构象状态，筛选的过程受细胞膜蛋白的表达水平和空间结构调控，这是纯化的蛋白无法模拟的；第二，通过改变洗涤条件，可偏向于介导细胞摄取的多肽的筛选。当使用纯化的膜蛋白时，选择过程往往由由单一的结合驱动；第三，还可以通过淘选发现新的细胞表面标志物。

淋巴瘤特异性标记物一直是临床肿瘤学的重要研究方向。淋巴瘤准确的诊断和分类是影响治疗和预后的关键。目前发现的淋巴瘤的标记物有生物标记物和分子标记物两种。部分标记物为淋巴瘤的分型提供了有利的支持，已经成为细胞学和组织病理学诊断的重要辅助手段，对淋巴瘤的诊断、治疗方案的选择、预后的判定具有重要意义。目前对淋巴瘤诊断具有重要意义的标记物有上皮膜抗原(epithelial membrane antigen，EMA)，分化抗原簇CD15+，分化抗原簇CD20+，CD45+，神经特异性烯醇化酶(neuron specific enolase，NSE)、c-met等。这些标记物已在临床上广泛应用，但是由于亚型的不同、标志物特异性差等因素，因此常常需要多种标志物联合使用。这些标识物既有优势也有局限性，多个标记物联合使用势必增加患者经济负担。因此寻找特异性高和敏感性高的标志物迫在眉睫。

发明内容