[发明专利]一种HLA-B*1502基因的检测方法及检测试剂盒

说明书

本发明涉及一种HLA‑B*1502基因的检测方法及检测试剂盒。所述检测方法包括如下步骤：(1)针对HLA‑B*1502基因设计特异性引物；(2)利用特异性PCR扩增包含HLA‑B*1502基因的目的片段；(3)利用限制性内切酶消化PCR产物片段；(4)进行单碱基延伸反应；(5)进行脱盐纯化处理；(6)通过核酸质谱仪检测分析目标基因HLA‑B*1502的基因序列。上述HLA‑B*1502基因的检测方法，检测准确性高、实验可重性高、通量大、成本低。本发明还提供了一种HLA‑B*1502基因的检测试剂盒，包括用于扩增HLA‑B*1502基因的特异性引物对。上述HLA‑B*1502基因的检测试剂盒，简化了实验流程，人员操作时间短、难度小，实验自动化程度高。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，特别是涉及一种HLA-B*1502基因的检测方法及检测试剂盒。

背景技术

卡马西平(carbamazepine)别名氨甲酰苯卓、氨甲酰苯卓、氨甲酰氮卓等，是一种用于治疗癫痫、外周神经痛、神经源性尿崩症，预防或治疗躁狂抑郁症的药物。卡马西平常见的副作用主要有：神经系统损害、造血系统损害、肝肾损害、胃肠道损害和皮肤损害。在美国，卡马西平用于治疗癫痫、躁狂/抑郁症和神经病理性疼痛。美国食品药品监督管理局(FDA)发布关于卡马西平的安全性信息，信息称，卡马西平会引起危险的甚至致命的皮肤反应(史蒂文斯-约翰逊综合征和中毒性表皮坏死溶解症)，尤其在含人白细胞抗原等位基因HLA- B*1502的患者中更容易发生。史蒂文斯-约翰逊综合征(Stevens Johnson syndrome，SJS)和中毒性表皮坏死溶解症(toxic epidermal necrolysis，TEN)是严重的皮肤和粘膜反应，可导致永久性残疾甚至致命。卡马西平导致SJS/TEN的几率很低，在白种人国家进行的针对卡马西平导致SJS/TEN的整体评估显示，S JS/TEN发生率只有万分之一至万分之六。但根据世界卫生组织(WHO)和卡马西平制药商收到的上市药品不良事件报告显示，一些亚洲国家出现SJS/TEN的概率大约要高出10倍。中国台湾、欧洲和中国香港的研究显示，SJS/TEN风险的增加与HLA-B*1502有关。几乎仅亚洲血统患者携带HLA-B*1502等位基因，包括南亚的印度人。HLA-B*1502可以通过遗传测试检测。携带HLA-B*1502 基因的患者在开始使用卡马西平治疗之前，应进行HLA-B*1502等位基因检测，如经检测结果呈阳性，则不宜使用卡马西平，除非药品的预期收益明显大于严重皮肤反应风险的增加。研究发现，在HLA-B基因座附近存在与某些亚型高度连锁的SNP，即“标签SNP”，HLA-B*1502的标签SNP是rs10484555的C等位基因，二者的特异性可达99.27％。因此，通过检测标签SNP来检测样本的H LA-B的基因型是一种新的研究方向。本发明旨在对患者展开rs10484555多态性筛查，为此类患者开展个性化精准诊治奠定临床及科研基础。

发明内容

基于此，有必要针对通过检测标签SNP来检测样本的HLA-B的基因型这一研究方向，提供HLA-B*1502基因的检测方法及检测试剂盒。

一种HLA-B*1502基因的检测方法，所述检测方法包括如下步骤：

(1)针对HLA-B*1502基因设计特异性引物；

(2)利用特异性PCR扩增包含HLA-B*1502基因的目的片段；

(3)利用限制性内切酶消化PCR产物片段；

(4)进行单碱基延伸反应；

(5)进行脱盐纯化处理；

(6)通过核酸质谱仪检测分析目标基因HLA-B*1502的基因序列。