[发明专利]一种太子参胰蛋白酶抑制剂及其制备方法

说明书

本发明涉及一种太子参胰蛋白酶抑制剂及其制备方法，包括：太子参蛋白粗提液的制备；采用硫酸铵分级沉降、DEAE阴离子交换层析及Sephadex G‑50凝胶过滤层析逐步纯化得到胰蛋白酶抑制剂；利用SDS‑PAGE验证胰蛋白酶抑制剂的纯度；利用Edman降解法测定胰蛋白酶抑制剂N末端氨基酸顺序。本发明从太子参中分离纯化得到一种新型的胰蛋白酶抑制剂，活性强、纯度高、设备成本低，且其具有极强的pH稳定性和良好的热稳定性。本发明为全面、合理利用太子参活性蛋白提供一定的理论指导，有助于植物资源的开发利用，以便其应用在食品药物等领域。

技术领域

本发明涉及一种太子参胰蛋白酶抑制剂及其制备方法，属于生物技术领域。

背景技术

胰蛋白酶抑制剂（Trypsin inhibitor）是一类能够抑制蛋白水解酶催化活性的蛋白质或肽，属于丝氨酸蛋白酶抑制剂家族。胰蛋白酶抑制剂广泛分布于动物、植物和微生物中，其中在乔本科植物和豆类中的研究较为深入。胰蛋白酶抑制剂具有调节蛋白酶、抗虫害、抗病毒、抗细胞增殖和抗真菌等活性。

太子参[Pseudostellaria heterophylla roots (Miq.) Pax.]又名孩儿参，石竹科太子参属植物。太子参略有甘味，属于温和滋补型食材，具有生津润肺之特性，历史悠久，传统药理学认为太子参药性温和，有润肺补脾、化痰消水肿之功效；现代药理学研究表明太子参具有降血糖、抗氧化、抗应激和增强机体免疫等功能。太子参中包含各类有效的化学成分，如氨基酸、环肽类、糖类等，这些化学成分与生物活性之间有密切的关系。目前，大多数研究专注于太子参多糖和环肽等，而对太子参中丰富的蛋白质研究较少。

发明内容

本发明的目的在于针对上述领域研究的不足，提供一种太子参胰蛋白酶抑制剂及其制备方法，该方法操作简单、设备成本低，且纯化得到的胰蛋白酶抑制剂纯度高，活性高且具有很强的酸碱稳定和较好的热稳定性。

为实现上述目的，采用以下技术方案：

本发明从太子参中分离纯化胰蛋白酶抑制剂的方法，包括如下步骤：

（1）太子参蛋白粗提液的制备：新鲜太子参块根匀浆，浸提，过滤，离心，取上清液；

（2）硫酸铵分级沉降：利用质量分数为20%-40%硫酸铵分级沉降初步纯化蛋白粗提液；

（3）柱层析：利用DEAE阴离子交换层析及Sephadex G-50凝胶过滤层析对蛋白粗提液进一步分离纯化，得到高纯度的胰蛋白酶抑制。

步骤（1）中太子参蛋白粗提液的制备如下：新鲜太子参块根清洗干净，以1:5-10质量体积比加入10-50mM、pH6.5-8.0的Tris-HCl缓冲液中，匀浆，4℃下搅拌浸提5-10h，砂布过滤；在10000r/min下离心10-30min，取上清液，即得太子参蛋白粗提液。

步骤（2）中的硫酸铵分级沉降步骤如下：将硫酸铵均匀缓慢加入太子参蛋白粗提液中，通过质量分数为20%-40%硫酸铵分级沉降太子参蛋白，离心获得沉淀，加入10-50mM、pH6.5-8.0Tris-HCl缓冲液溶解沉淀，用相同的缓冲液在4℃下透析24-36h，期间更换3-4次缓冲液，透析结束后4℃、10000r/min离心10-30min，收集上清液。