[发明专利]一种人类酒精代谢能力基因突变位点的检测方法及试剂盒

权利要求书

1.一种人类酒精代谢能力基因突变位点的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括如下步骤：

(1)针对乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点和乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点设计特异性引物；

(2)利用特异性PCR扩增出包含乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点和乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点的目的片段；

(3)利用限制性内切酶消化PCR产物片段；

(4)进行单碱基延伸反应；

(5)进行脱盐纯化处理；

(6)通过核酸质谱仪检测分析目标基因乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点和乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点的序列。

2.根据权利要求1所述的人类酒精代谢能力基因突变位点的检测方法，其特征在于，所述步骤(1)中设计的特异性引物包括用于扩增乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点和乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点基因的特异性引物对，所述特异性引物对包含一条乙醇脱氢酶乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点的正向引物SEQ ID Nos：1，和一条乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点的反向引物SEQ ID Nos：2，以及包含一条乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点的正向引物SEQ ID Nos：3，和一条乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点的反向引物SEQ IDNos：4。

3.根据权利要求1所述的人类酒精代谢能力基因突变位点的检测方法，其特征在于，所述步骤(2)中特异性PCR扩增的反应程序为：98℃热启动，10分钟；95℃变性，30秒；55℃退火，30秒；72℃延伸，30秒；扩增40个循环；72℃终延伸，5分钟。

4.根据权利要求1所述的人类酒精代谢能力基因突变位点的检测方法，其特征在于，所述步骤(3)中的限制性内切酶进行消化处理条件为：37℃消化处理45分钟，85℃加热变性5分钟，冰浴10分钟。

5.根据权利要求1所述的人类酒精代谢能力基因突变位点的检测方法，其特征在于，所述步骤(3)中的限制性内切酶为虾碱性磷酸酶。

6.根据权利要求1所述的人类酒精代谢能力基因突变位点的检测方法，其特征在于，所述步骤(4)中单碱基延伸反应包括乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点和乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点的单碱基延伸引物，所述乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点的单碱基延伸引物包含一条单碱基延伸引物SEQ ID Nos：5，所述乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点的单碱基延伸引物包含一条单碱基延伸引物SEQ ID Nos：6。

7.根据权利要求1所述的人类酒精代谢能力基因突变位点的检测方法，其特征在于，所述步骤(4)中单碱基延伸反应的反应程序为：95℃热启动，1分钟；95℃变性，5秒；56℃退火，5秒；80℃延伸，5秒；扩增40个循环；72℃终延伸，3分钟。

8.根据权利要求1所述的人类酒精代谢能力基因突变位点的检测方法，其特征在于，所述步骤(6)的核酸质谱检测的具体步骤为：

(1)在树脂板上铺好待用树脂，风干5-10分钟；

(2)向样本板的反应孔中加入待测的样本，补充25ul ddH₂O，用封口膜密封，3000转/分钟瞬时离心；

(3)除去封口膜，将样本板倒扣在步骤(1)的树脂板上固定，然后将样本板和树脂板一起翻转，使风干的树脂落入样本板的反应孔内，用封口膜密封，3000转/分钟瞬时离心；

(4)将样本板置于旋转器上慢速旋转20分钟，再3000转/分钟离心5分钟，然后点样上机，用核酸质谱仪进行检测。