[发明专利]一种间充质干细胞的无血清培养基

权利要求书

1.一种间充质干细胞的培养基，包括无血清培养基、碱性成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子、血小板衍生因子PDGF、转化生长因子–β、转铁蛋白、L-谷氨酞胺、黄芪多糖、维生素、胰岛素、氢化可的松、纤连蛋白和亚油酸。

2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述无血清培养基为lonzaUltraCULTURE MEDIUM无血清培养基。

3.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述碱性成纤维细胞生长因子浓度为1-100ng/m L，所述表皮细胞生长因子浓度为5-20ng/m L，所述血小板衍生因子PDGF浓度为5-10μg/L，所述转化生长因子-β浓度为1-100ng/m L，所述转铁蛋白浓度为5-20mg/L，所述L-谷氨酞胺浓度为1-5mM，所述黄芪多糖浓度为40-80mg/L，所述维生素浓度为50-100mg/L，所述胰岛素浓度为1-10U/ml，所述氢化可的松浓度为5-20mg/L，所述纤连蛋白浓度为5-50mg/L、所述亚油酸2-10mg/L。

4.一种间充质干细胞的大规模培养方法，取P1代间充质干细胞接种权利要求1所述间充质干细胞的培养基，置于5％CO₂、37℃培养箱培养，当细胞融合度达到80％～90％后传代。

5.根据权利要求4所述的大规模培养方法，接种密度为1×10⁵/mL-2×10⁶/mL P1代间充质干细胞。

6.根据权利要求4所述的大规模培养方法，所述间充质干细胞为骨髓间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、脐带间充质干细胞、胎盘间充质干细胞、牙髓间充质干细胞或外周血间充质干细胞。

7.根据权利要求4-6任意一项所述的大规模培养方法，所述P1代间充质干细胞的原代分离培养方法具体为组织块剪碎，加入完全培养基，于37℃，5％CO₂静止培养，期间补加完全培养基，待组织块有细胞爬出后去掉组织块，清洗后加入完全培养基继续培养，当细胞融合度达到80％～90％后，去掉细胞培养上清，清洗后加入含胰蛋白酶消化液消化，完全培养基终止消化，离心，弃上清，用完全培养基重悬。

8.根据权利要求7所述的大规模培养方法，所述原代分离培养方法中所述含胰蛋白酶消化液中胰蛋白酶浓度为0.25v/v％，所含EDTA浓度为0.04v/v％。

9.根据权利要求7所述的大规模培养方法，所述原代分离培养方法中消化液消化的时间为1-2min。